大腸癌干細胞惡性生物學行為相關基因篩選及其功能鑒定.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文大腸癌干細胞惡性生物學行為相關基因篩選及其功能鑒定姓名：王一刻申請學位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學指導教師：黃建朱永良20100401浙江人學博t學位論文中文摘要長曲線并無明顯差別。進一步，CDl33細胞在NOD／SCID小鼠體內(nèi)的皮下移植成瘤能力也明顯高于CDl33細胞。這一系列結(jié)果證明其結(jié)腸癌CDl33亞群細胞中富集大腸癌干細胞，CDl33可以作為一個富集大腸癌干細胞的可靠標志。我們進一步通過比較CDl33細胞

2、和CDl33細胞的基因表達譜，運用生物信息學分析腫瘤干細胞中特異性表達的基因和分子信號通路，發(fā)現(xiàn)CDl33大腸癌細胞中321個基因表達明顯上調(diào)，65個基因表達明顯下調(diào)。信號通路分析P13剛Ah，Notch，JAK／STATMAPK和TGFD通路相關基因改變。P13K／Akt和MAPK信號通路在人類腫瘤譜中廣泛失調(diào)，對細胞增殖、分化和凋亡的調(diào)節(jié)起重要作用，其組分活化與腫瘤發(fā)生和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有密切關系。我們檢測了P13K／Akt和MAPK信

3、號通路中的主要激酶的活性，包括Erkl／2、p38、JNK、GSK3p和Akt，發(fā)現(xiàn)Erkl／2和Akt在CDl33細胞中被激活，p38、JNK和GSK3p的活性在兩群細胞間沒有明顯差異，推測Erkl／2和Akt的激活可能對CDl33細胞的成瘤性有重要作用。因此我們用Akt抑制劑II、Akt抑制劑IV和MAPK抑制劑U0126抑制Akt和Erkl／2的激活，發(fā)現(xiàn)CDl33細胞在軟瓊脂中的克隆形成能力明顯下降。經(jīng)過抑制劑處理的CDl33細

4、胞在NOD／SCID小鼠體內(nèi)成瘤能力也有下降。同時，我們用AktshRNA和ErkshRNA干擾大腸癌細胞中的Akt和Erk的表達，CDl33細胞的克隆形成能力同樣下降。因此，CDl33大腸癌細胞的克隆形成能力很可能與Akt和Erk的激活有關。此外，我們發(fā)現(xiàn)Akt沉默的CDl33細胞在transweU中的遷移能力下降，說明Akt還可能促進了CDl33細胞的浸潤轉(zhuǎn)移。本研究表明，CDl33是富集大腸癌干細胞的有效標志，CDl33細胞中P1