GnRH六聚體-麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP-GnRH-6）的融合表達及鑒定.pdf

1、目的：用基因工程法生產(chǎn)高質(zhì)量低成本的GnRH疫苗。 方法：將人工合成的哺乳型GnRH六聚體基因插入麥芽糖結(jié)合蛋白融合表達系統(tǒng)pMAL-c2x中，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(E.coli BL21)中。文中采用IPTG進行誘導表達。用超聲波細胞破碎儀破碎細菌。用多糖樹脂(amylose resin)親和層析法純化蛋白。應用SDS-PAGE方法對純化蛋白進行分析。采用間接ELISA方法鑒定融合蛋白的反應原性。并以小白鼠進行動物試驗，觀察

2、其性腺發(fā)育情況以及睪丸組織學變化情況，從而鑒定融合蛋白的免疫原性。 結(jié)果：與麥芽糖結(jié)合蛋白基因融合的GnRH六聚體基因在：E.coli BL21中能夠高效表達；多糖樹脂親和層析方法，具有良好的純化效果(濃度達4.06mg/ml)；表達的融合蛋白分子量大小與理論值(53.5kD)一致；間接ELISA試驗結(jié)果表明，融合蛋白與GnRH抗體的反應性較好，陽性組OD<,492>值/陰性組OD<,492>值>2.1。 動物試驗結(jié)果顯

3、示，試驗組小白鼠睪丸的各項指標(長度、寬度、周長、重量)均小于對照組，并且睪丸長度和重量的前后差異極顯著(7.6233mm vs 8.1200mm，P<0.01；0.09619g vs0.1137g，P<0.01)，睪丸周長也顯著降低(20.0867mm vs 21.6322mm，0.010.05)；將睪丸制作切片后觀察，發(fā)現(xiàn)實驗組小白鼠睪丸生精小

4、管變化明顯，精原細胞、精母細胞、精子細胞層次不分明，間質(zhì)結(jié)締組織增生，且無精子產(chǎn)生，雖然有的睪丸有少量精子產(chǎn)生，但睪丸生精小管開始出現(xiàn)空泡變性。對照組小白鼠的睪丸生精小管結(jié)構(gòu)正常，生精小管中有正常的精原細胞、精母細胞、精子細胞及精子，并且層次分明，有大量精子產(chǎn)生。這表明由麥芽糖結(jié)合蛋白融合表達系統(tǒng)表達的MBP-GnRH-6融合蛋白能夠刺激小白鼠產(chǎn)生GnRH抗體，并使睪丸發(fā)生萎縮，MBP-GnRH-6融合蛋白有望成為GnRH疫苗用于家畜的