祖師麻主要活性成分的口服吸收及代謝研究.pdf

1、本篇論文研究來(lái)源于教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目“基于酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的祖師麻口服吸收及代謝研究”（208051）和江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目“祖師麻主要活性成分的口服吸收及代謝研究”（CX07B_2372）。 祖師麻為瑞香科植物黃瑞香Daphne giraldii Nitsche、陜甘瑞香D.tangutica Maxim或凹葉瑞香D.retusa Hemsl的莖皮和根皮，為西部地區(qū)民間用藥。 采用紫外分光光度法（U

2、V）測(cè)定了祖師麻中總香豆素的含量，高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定了祖師麻中祖師麻甲素的含量，并分別進(jìn)行了方法學(xué)考察。祖師麻藥材中總香豆素和祖師麻甲素的含量分別為3％和0.2％左右。 采用弗式完全佐劑造成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，造模后第7天開(kāi)始給藥，持續(xù)21天后取關(guān)節(jié)滑膜組織做病理檢查，觀察滑膜細(xì)胞增生的情況；同時(shí)測(cè)定血清中巨噬細(xì)胞游走抑制因子（MIF）、腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素1（IL-1）的含量。結(jié)果表明，祖師麻甲

3、素能顯著抑制膝關(guān)節(jié)滑液中炎細(xì)胞（主要是巨噬細(xì)胞）的過(guò)度增生，抑制滑膜組織增生和滑膜細(xì)胞下疏松結(jié)締組織充血；能較顯著降低血清中3種炎癥細(xì)胞因子的含量。祖師麻總香豆素的作用比祖師麻甲素略強(qiáng)，但無(wú)顯著性差異，因此可以確定祖師麻甲素是祖師麻治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的主要活性成分之一。 初步考察了祖師麻甲素的理化性質(zhì)，如表觀溶解度、表觀油水分配系數(shù)等。結(jié)果表明，祖師麻甲素屬于生物藥劑學(xué)分類(lèi)學(xué)中的第二類(lèi)藥物，即溶解性能較差，但滲透性能好，為祖師麻

4、口服吸收機(jī)制及代謝研究奠定基礎(chǔ)。 研究了祖師麻甲素在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為。祖師麻甲素經(jīng)大鼠靜脈注射（50 mg/kg）和灌胃給藥（250 mg/kg）后的藥-時(shí)曲線均符合單室開(kāi)放模型；消除半衰期t1/2分別為3.5和17.7 min，祖師麻甲素在大鼠體內(nèi)能快速分布并消除，口服絕對(duì)生物利用度為24.6％。祖師麻甲素灌胃給藥（5、25、125mg/kg）后2小時(shí)大鼠尿液內(nèi)可檢測(cè)到原形藥物，48小時(shí)內(nèi)經(jīng)尿液排泄基本完全，原形藥物的

5、累積排泄量不超過(guò)給藥量的6％。 采用大鼠在體單向腸灌流模型研究了不同劑量組、不同小腸區(qū)段（十二指腸、回腸、空腸、結(jié)腸）祖師麻甲素的吸收情況。結(jié)果表明：10μg/mL祖師麻甲素在大鼠各腸段的表觀滲透系數(shù)按十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸的順序依次為1.52±0.79、1.34±1.09、1.41±0.50、0.54±0.34；20μg/mL祖師麻甲素表觀滲透系數(shù)按順序依次為1.54±0.09、1.48±0.11、1.44±0.36、0.

6、72±0.09；40μg/mL祖師麻甲素表觀滲透系數(shù)按順序依次為2.12±0.81、1.99±0.23、1.59±0.90、1.12±1.05。祖師麻甲素在大鼠腸段不同部位不存在吸收差異，其吸收以被動(dòng)擴(kuò)散為主。 采用Caco-2細(xì)胞單層模型研究了祖師麻甲素的攝取和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，結(jié)果表明，祖師麻甲素?cái)z取與時(shí)間、溫度呈正相關(guān)，不受媒介pH值的影響。隨著藥物濃度的增加，祖師麻甲素PBA/ PAB的比值呈降低趨勢(shì)。在加入P-gp抑制劑維拉帕

7、米后，祖師麻甲素PBA/ PAB未發(fā)生明顯變化；加入MRP2抑制劑環(huán)孢素后，PBA/PAB降低了10％；加入BCRP抑制劑潘生丁后，PBA/PAB降低了29％。祖師麻甲素跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的方式以被動(dòng)擴(kuò)散為主，其吸收不受P-gp的影響，但可能存在腸道轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP2、BCRP的外排。 祖師麻甲素在大鼠腸道和Caco-2細(xì)胞單層模型均發(fā)生了Ⅱ相代謝反應(yīng)。在大鼠腸道灌流液中共檢測(cè)到4個(gè)代謝產(chǎn)物，經(jīng)色譜及質(zhì)譜信息分析，推測(cè)這些代謝產(chǎn)物為祖師麻甲

8、素-7-硫酸酯、祖師麻甲素-8-硫酸酯、祖師麻甲素-7-葡萄糖醛酸結(jié)合物和祖師麻甲素-8-葡萄糖醛酸結(jié)合物，祖師麻甲素在大鼠腸道的代謝途徑主要是與葡萄糖醛酸、硫酸的結(jié)合反應(yīng)；在Caco-2細(xì)胞單層模型接受液中共檢測(cè)到2個(gè)代謝產(chǎn)物，經(jīng)色譜及質(zhì)譜信息分析，推測(cè)這2個(gè)代謝產(chǎn)物為祖師麻甲素-7-葡萄糖醛酸結(jié)合物和祖師麻甲素-8-葡萄糖醛酸結(jié)合物，祖師麻甲素在Caco-2細(xì)胞單層模型主要是與葡萄糖醛酸的結(jié)合反應(yīng)。 研究了祖師麻甲素大鼠尿液

9、、膽汁、血漿中的代謝情況。在大鼠尿液中發(fā)現(xiàn)祖師麻甲素的7個(gè)代謝產(chǎn)物，經(jīng)色譜及質(zhì)譜信息分析，推測(cè)這些代謝產(chǎn)物為祖師麻甲素-7-硫酸酯、祖師麻甲素-8-硫酸酯、祖師麻甲素-7-葡萄糖醛酸結(jié)合物、祖師麻甲素-8-葡萄糖醛酸結(jié)合物、祖師麻甲素-7-甲氧基-8-萄糖醛酸結(jié)合物、祖師麻甲素-8-甲氧基-7-葡萄糖醛酸結(jié)合物、祖師麻甲素甲基化產(chǎn)物、祖師麻甲素羥基化產(chǎn)物。在大鼠膽汁中發(fā)現(xiàn)2個(gè)代謝產(chǎn)物，經(jīng)分析分別為祖師麻甲素-7-葡萄糖醛酸結(jié)合物、祖師麻