成骨細(xì)胞異位移植免疫學(xué)檢測(cè)及體內(nèi)轉(zhuǎn)歸分析.pdf

1、目的：建立GFP標(biāo)記的同胎、同種異系及異種成骨細(xì)胞腹直肌袋異位移植模型，檢測(cè)其誘導(dǎo)的體液免疫及細(xì)胞免疫反應(yīng)，預(yù)計(jì)組織工程骨移植及骨細(xì)胞移植的宿主免疫反應(yīng)情況，觀察移植物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸過(guò)程，進(jìn)而從移植生理學(xué)及種系的角度研究工程骨及細(xì)胞移植種子細(xì)胞的可靠來(lái)源，展望工程骨及骨細(xì)胞移植的臨床應(yīng)用前景及適用范圍。方法：(1)成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)及GFP標(biāo)記：成骨細(xì)胞培養(yǎng)取材于5周齡大耳白兔脛骨骨膜，用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶消化后接種培養(yǎng)。SD大鼠成骨細(xì)胞

2、取材于生后3天SD大鼠顱骨，方法同上。取生長(zhǎng)良好細(xì)胞，用脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒pIRES2-EGFP進(jìn)行轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)后更換篩選培養(yǎng)基擴(kuò)增，并經(jīng)電鏡及熒光顯微鏡鑒定。(2)動(dòng)物分組與細(xì)胞移植：同種異系移植組A，同胎移植組B，異種移植組C，自體移植組D各12只。細(xì)胞注入腹直肌袋內(nèi)。A、B組注入兔成骨細(xì)胞，C組注入SD大鼠成骨細(xì)胞，D組注入自體耳廓軟骨懸液。(3)檢測(cè)指標(biāo)：包括用ELISA法進(jìn)行血清內(nèi)抗體的檢測(cè)，用3H-TDR摻入法淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)檢測(cè)