粉紋夜蛾抗Bt Cry1Ac毒素細胞與敏感細胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析.pdf

1、自1957年美國太平洋酵母公司生產(chǎn)出第一個蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis Bt)商品制劑以來，Bt殺蟲劑作為一種對人畜安全、無環(huán)境污染、產(chǎn)量高、效果好的微生物殺蟲劑，在農(nóng)、林及衛(wèi)生害蟲的防治中發(fā)揮了重要作用，成為國內(nèi)外開發(fā)應(yīng)用最成功的一種生物農(nóng)藥。但隨著它的廣泛使用和多種轉(zhuǎn)Bt基因植物的推廣，害蟲已經(jīng)對Bt產(chǎn)生了明顯的抗藥性，因此如何治理好昆蟲對Bt的抗性已成為害蟲防治中的重要問題。只有弄清楚昆蟲抗性形成的分

2、子機制，才能制定出合理的抗性管理策略，延緩抗性的產(chǎn)生。 本實驗室的前期工作已經(jīng)證明了粉紋夜蛾離體培養(yǎng)的細胞能夠?qū)t殺蟲晶體蛋白CrylAc產(chǎn)生一定水平的抗性，而且細胞系對Bt抗性特點與蟲體的類似。因此本實驗采用了對Bt CrylAc毒素十分敏感的BT1-TN-581細胞和同源的抗性細胞為實驗材料，利用CrylAc毒素蛋白，經(jīng)過連續(xù)的，高強度的抗性篩選，采用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，從蛋白質(zhì)水平上來揭示兩種細胞的差異。

3、 通過雙向電泳技術(shù)，得到了粉紋夜蛾對Bt CrylAc抗性細胞和敏感細胞的總蛋白質(zhì)電泳圖譜，以ImageMaster Elite 5.0v軟件來分析，發(fā)現(xiàn)CrylAc抗性細胞的總蛋白質(zhì)點平均為896個，敏感細胞的總蛋白質(zhì)點平均為838個。大部分蛋白分布在14-100KD之間，大部分蛋白的pI主要在4-9之間，酸性段和堿性段基本上沒有分離到蛋白質(zhì)點。挖取了細胞總蛋白圖譜中幾個重復(fù)性良好的蛋白質(zhì)點，將這些點進行了肽質(zhì)指紋圖譜鑒定，通過通過M

4、ascot檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，找到了幾個可能與其有同源性的蛋白質(zhì)，通過計算機軟件的分析，在分值上和肽段的覆蓋率上最為接近的一個蛋白質(zhì)A為變形菌門γ-變形菌綱Idiomarina loihiensis L2TR的鞭毛驅(qū)動蛋白(flagellar motor protein)，它與細菌質(zhì)膜上的蛋白具有一定程度的同源性。表明該蛋白質(zhì)可能是一種與細胞膜蛋白相似的蛋白。另外，對該點PMF的肽段分析發(fā)現(xiàn)該蛋白的1-44肽段與DNA甲酰氨基嘧啶-糖基化