超聲微泡造影劑傳送TFPI-2抑制動(dòng)脈血栓和狹窄.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化是一種多因素慢性炎癥反應(yīng)疾病。動(dòng)脈內(nèi)血栓和狹窄是動(dòng)脈粥樣硬化的特征。目前沒有一個(gè)治療動(dòng)脈粥樣硬化的理想方法。動(dòng)脈粥樣硬化的基因治療已經(jīng)被廣泛研究，但臨床應(yīng)用沒有開展。組織因子（TF）是一個(gè)穿膜蛋白，在體內(nèi)啟動(dòng)血液凝聚有助動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。組織因子途徑抑制因子-2（TFPI-2）形成TF-FVIIa-Fxa-TFPI-2復(fù)合體抑制TF活性。導(dǎo)致TF途徑持續(xù)抑制和細(xì)胞外基質(zhì)消化與重構(gòu)。因此，TFPI-2具有防止動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)

2、制。TFPI-2可能成為一個(gè)抑制動(dòng)脈內(nèi)血栓和狹窄的選擇基因。可是傳送此基因進(jìn)入靶向疾病組織是一個(gè)主要的障礙。微泡造影劑與超聲波間的相互作用能改變生物膜的通透性并促進(jìn)基因傳送入細(xì)胞。這可能成為一種傳送基因入動(dòng)脈血管壁的潛在方法。在本研究，我們用SonoVue（一種超聲微泡造影劑）在體外與體內(nèi)傳送TFPI-2基因觀察此動(dòng)脈粥樣硬化治療基因的作用。
　　 第一部分 超聲微泡傳送TFPI-2基因入血管內(nèi)皮細(xì)胞的探討探討超聲微泡造影劑So

3、noVue作為傳送工具，攜帶TFPI-2基因轉(zhuǎn)染人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的效率并與其它轉(zhuǎn)染方法比較。首先，成功構(gòu)建pEGFP-TFPI-2，pcDNA3.1-TFPI-2重組質(zhì)粒和腺病毒Ad-EGFP-IRES-TFPI-2，并大量制備純化備用。觀察到超聲波和SonoVue對(duì)HUVEC沒有損傷作用并且SonoVue黏附質(zhì)粒的效率高達(dá)90.1％。再進(jìn)行不同轉(zhuǎn)染方式的分組實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率：（1）對(duì)照組：質(zhì)粒；（2）脂質(zhì)體組：質(zhì)粒+

4、脂質(zhì)體組；（3）SonoVue組：質(zhì)粒+微泡+超聲；（4）腺病毒組：質(zhì)粒+腺病毒。24h后，熒光顯微鏡、RT-PCR和 Western blot檢驗(yàn)它們的轉(zhuǎn)染效率及TFPI-2基因的表達(dá)水平。SonoVue組和腺病毒組的轉(zhuǎn)染效率明顯高于脂質(zhì)體組，而SonoVue組和腺病毒組間的轉(zhuǎn)染效率沒有顯著不同。同樣，SonoVue組和腺病毒組的TFPI-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)高于其它組。這些結(jié)果提供SonoVue傳送TFPI-2基因入動(dòng)脈管壁的基

5、礎(chǔ)。
　　 第二部分 超聲微泡傳送TFPI-2抑制動(dòng)脈血栓和狹窄的研究動(dòng)脈粥樣硬化是以動(dòng)脈血管壁的慢性炎癥反應(yīng)致動(dòng)脈血管狹窄和血栓形成為特點(diǎn)的一種疾病。快速流動(dòng)血液的動(dòng)脈血管內(nèi)傳送治療基因入動(dòng)脈管壁是一個(gè)理想的基因治療方法。本研究探討用SonoVue傳送TFPI-2基因入動(dòng)脈血管壁抑制動(dòng)脈血栓和狹窄。用2.0 Fogarty catheter球囊損傷兔頸總動(dòng)脈建立動(dòng)脈損傷模型作為陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)組。且發(fā)現(xiàn)SonoVue能傳送pEGFP-

6、TFPI-2入動(dòng)脈血管壁，其轉(zhuǎn)染效率高于腺病毒組?；谏鲜鼋Y(jié)果進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)探討TFPI-2基因抑制動(dòng)脈血栓和狹窄的效果：（1）第一陰性組：不作任何處理；（2）第二陰性組：PBS+質(zhì)粒+超聲波；（3）陽(yáng)性組：動(dòng)脈損傷模型；（4）SonoVue組：質(zhì)粒+SonoVue+超聲波；（5）腺病毒組：隨帶TFPI-2基因病毒。第十天所有實(shí)驗(yàn)組兔的頸總動(dòng)脈進(jìn)行超聲波、張力、病理學(xué)與Western blot檢測(cè)。兩陰性對(duì)照組動(dòng)脈內(nèi)膜未見噬斑和狹窄，So