兒童常見實(shí)體惡性腫瘤診斷和治療相關(guān)基因篩選的研究.pdf

1、第一部分：動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)小兒惡性腫瘤化療兒外周血MDR1、MRP、LRP的表達(dá)
　　 目的：探討小兒實(shí)體惡性腫瘤化療患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）中多藥耐藥基因（Multi-drug resistancel，MDR1）、多藥耐藥相關(guān)蛋白基因（Multi-drugresistance-associated proteinl，MRP）、肺耐藥蛋白基因（Lung re

2、sistanceprotein，LRP）的表達(dá)量及其與臨床化療的關(guān)系。
　　 方法：經(jīng)病理證實(shí)的腫瘤患兒59例，其中神經(jīng)母細(xì)胞瘤組24例，卵黃囊瘤組16例，淋巴瘤組19例；30例健康兒童作對(duì)照組。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）技術(shù)，檢測(cè)化療患兒化療前后外周血和手術(shù)切除新鮮凍存組織，以及對(duì)照組外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達(dá)量；常

3、規(guī)檢測(cè)化療患兒化療前后相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物的變化。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法將化療患兒化療前與對(duì)照組外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達(dá)量進(jìn)行T檢驗(yàn)；化療患兒化療前后外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達(dá)量與手術(shù)切除腫瘤組織的MDR1、MRP、LRP的表達(dá)量、相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物化療前后的變化程度作相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：神經(jīng)母細(xì)胞瘤組、卵黃囊瘤組化療前MDR1的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；淋巴瘤組化療

4、前MDR1的表達(dá)量與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；所有化療患兒外周血中MRP、LRP表達(dá)量化療前與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有化療患兒外周血MDR1表達(dá)量與同期手術(shù)切除的腫瘤組織MDR1表達(dá)量存在正相關(guān)（r=0.894，P=0.000）；化療前外周血MDR1表達(dá)量與首次化療后相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物變化大小的關(guān)系，神經(jīng)母細(xì)胞瘤尿香草杏仁酸（VMA）（r=-0.440，P=0.046），卵黃囊瘤甲胎蛋白（AFP）（r=-0

5、.831，P=0.000），淋巴瘤乳酸脫氫酶（LDH）（r=-0.495，P=0.031）?；熁純弘S著化療次數(shù)的增加MDR1表達(dá)量增加。
　　 結(jié)論：神經(jīng)母細(xì)胞瘤與卵黃囊瘤可能存在一定程度的原發(fā)耐藥；外周血的MDR1表達(dá)及組織MDR1表達(dá)與化療療效有明顯負(fù)相關(guān)；化療可誘導(dǎo)各種惡性實(shí)體瘤患兒：PBMCs中MDR1表達(dá)增加，對(duì)MRP、LRP影響不大；動(dòng)態(tài)檢測(cè)患兒化療前后PBMCs中mdr1 mRNA水平對(duì)化療療效及預(yù)后判定有一定的

6、參考作用。
　　 第二部分神經(jīng)母細(xì)胞瘤相關(guān)標(biāo)志物的檢測(cè)
　　 目的：探討運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescencequantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）定量檢測(cè)BCL-2基因mRNA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤（NB）的表達(dá)和運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒外周血VEGF、NSE、SF的表達(dá)，及其與神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系。
　　 方法：收集神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒手術(shù)切除標(biāo)本16例

7、，--80℃保存，其中化療前標(biāo)本6例、化療后標(biāo)本8例、既有化療前又有化療后標(biāo)本2例，并在設(shè)定時(shí)間采集患兒外周血，離心收集血漿-80℃保存。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)所有標(biāo)本中BCL-2和N-MYC基因的mRNA表達(dá)情況，同時(shí)收集相應(yīng)腫瘤標(biāo)本的石蠟切片，進(jìn)行免疫組化檢測(cè)。運(yùn)用ELISA方法檢查神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒外周中VEGF、NSE、SF的表達(dá)。采用Evans標(biāo)準(zhǔn)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒進(jìn)行臨床分期，所有組織標(biāo)本均進(jìn)行Shimade分型。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)方法比較Ⅰ～Ⅱ及ⅣS期與Ⅲ-Ⅳ期、F型與UF型、化療前與化療后神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中BCL-2基因的mRNA表達(dá)量的大小及BCL-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的大?。环治鯞CL-2的表達(dá)與N-MYC基因和耐藥基因表達(dá)的相關(guān)性；及化療、手術(shù)前后外周血VEGF、NSE、SF的表達(dá)變化；BCL-2、VEGF、NSE、SF與神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的BCL-2基因mRNA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)量Ⅲ～

9、Ⅳ期明顯高于Ⅰ～Ⅱ及ⅣS期（P<0.05）、UF型明顯高于F型（P<0.05）、化療后高于化療前的表達(dá)（P<0.05），免疫組化結(jié)果與PCR結(jié)果基本一致；BCL-2的表達(dá)與N-MYC的拷貝數(shù)呈明顯正相關(guān)（P<0.05），與耐藥基因的表達(dá)無明顯相關(guān)（P>0.05）；BCL-2、VEGF、NSE、SF的表達(dá)量與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　 結(jié)論：BCL-2作為一種重要的凋亡調(diào)控基因，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢