氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠腎小管鈉-氫交換蛋白3表達的影響及其腎臟保護作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠腎小管鈉/氫交換蛋白3亞型表達的影響
　　 目的:觀察氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠( Spontaneously hypertensive rat, SHR)腎小管鈉/氫交換蛋白3亞型(Sodium hydrogen exchanger isform3, NHE3)的表達的影響，并探討血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白激酶1( Serum and glucocorticoid

2、inducible kinase1, SGK1)的表達變化，同時觀察氯沙坦在影響SHR腎小管NHE3表達的過程中，是否與SGK1的表達變化有關(guān)，為深入認識氯沙坦抗高血壓的藥效學(xué)機制提供新的依據(jù)，并為研發(fā)新型的抗高血壓藥提供新的作用靶點。
　　 方法:自發(fā)性高血壓大鼠12只，隨機分為氯沙坦灌胃組(Los組)及溶媒灌胃組((SHR組)各組6只:Wistar Kyoto大鼠( WKY組)6只為空白對照組。Los組按每只大鼠30mg/k

3、g/day灌胃，WKY組及溶媒SHR組每日灌胃體積的溶媒。根據(jù)大鼠體重，每周調(diào)整藥物劑量一次；連續(xù)灌胃至18周齡。每兩周以尾套法測量大鼠收縮壓。收集血漿及腎臟，放免法測定各組大鼠血漿和腎組織中血管緊張素Ⅱ(Angiotensin II，AngⅡ)水平;實時熒光定量PCR檢測各組大鼠腎小管SGK1、NHE3 mRNA表達的變化:免疫組織化學(xué)過氧化物酶連接法及圖像分析方法測定腎內(nèi)NHE3蛋白的定位和表達。
　　 結(jié)果:1、SHR組收

4、縮壓高于WKY組(P<0.01)，Los組從10w開始氯沙坦連續(xù)灌胃2w后，其收縮壓顯著低于SHR組(P<0.05),在此后連續(xù)氯沙坦灌胃的6w時間里，收縮壓平穩(wěn)下降(P<0.01);2、在連續(xù)灌胃8w后，Los組血漿AngⅡ水平顯著高于WKY組(P<0.05)，而與SHR組無顯著性差異((P>0.05);Los組腎組織的AngⅡ水平也顯著高于WKY組(P<0.05)，與SHR組比較，也無顯著性差異((P>0.05);3、實時熒光定量P

5、CR檢測結(jié)果顯示相對于正常WKY組，SHR組腎小管的NHE3mRNA表達量增加了2.3倍，而Los組的僅增加了1.65倍;4、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:相對于WKY組，溶媒SHR組NHE3蛋白在腎小管上皮細胞呈明顯強陽性，蛋白表達量最高，灰度值評分最低;Los組NHE3蛋白在腎小管上皮細胞呈中度強陽性，蛋白表達量有所增加。5、與WKY組相比，SHR組腎小管的SGK1mRNA表達量增加3.31倍，而Los組的僅增加了1.84倍。
　

6、　 結(jié)論:1、自發(fā)性高血壓大鼠血漿和腎組織RAS普遍激活，氯沙坦不能抑制RAS的激活。2、自發(fā)性高血壓大鼠腎小管NHE3mRNA和蛋白均有異常的過度表達，AT1受體的激活是此過度表達的原因之一。3、自發(fā)性高血壓大鼠腎臟SGK1mRNA經(jīng)AT1受體介導(dǎo)也有異常的過度表達，這可能是導(dǎo)致NHE3過度表達的一個中間環(huán)節(jié)。4、氯沙坦對高血壓病的藥效動力學(xué)機制可能涉及這種AT1受體的非肽類拮抗劑對腎小管SGK1和NHE3過度表達的限制。5,氯沙坦

7、對自發(fā)性高血壓大鼠腎小管SGK1和NHE3過度表達的限制，與其降壓療效具有時間上的一致性。
　　 第二部分、氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠氧化應(yīng)激及腎功能的影響
　　 目的:觀察氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠氧化應(yīng)激及腎功能的影響，探討氯沙坦對高血壓腎損害的保護機制。
　　 方法:自發(fā)性高血壓大鼠12只，隨機分為氯沙坦灌胃組(Los組)及溶媒灌胃組((SHR組)各組6只;Wistar Kyoto大鼠(WKY組)6只為空白對照

8、組。Los組按每只大鼠30mg/kg/day灌胃，WKY組及溶媒SHR組每日灌胃體積的溶媒。根據(jù)大鼠體重，每周調(diào)整藥物劑量一次:連續(xù)灌胃至18周齡。收集尿、血清及腎組織HE染色觀察其形態(tài)學(xué)變化:放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA)測定尿β2-微球蛋白(β2- microglobulin,β2-MG)的含量;比色法測定血清中血肌酐(Serum creatinine, SCr)、血尿素氮( Blood ureanit

9、rogen, BUN)，血清和腎組織一氧化氮(Nitric oxide, NO),超氧化物岐化酶( Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛( Malefic dialdehyde, MDA)水平。
　　 結(jié)果:1.與18周齡WKY組比較，溶媒灌胃SHR組大鼠血清及腎組織N0, SOD水平均顯著降低(P<0.01; P<0.01)，但MDA水平顯著升高(P<0.01); Los組在氯沙坦連續(xù)灌藥8w后，血清及

10、腎組織中N0, SOD水平較SHR組顯著升高(P<0.05; P<0.05)，而MDA的含量則明顯降低(P<0.05);2.與18周齡的WKY組比較，溶媒灌胃SHR大鼠血清SCr水平略有升高但無顯著性差異(P>0.05);血清BUN及尿β2-微球蛋白明顯增加(P<0.05; P<0.01)， Los組在氯沙坦連續(xù)灌胃8w后，血清BUN及尿β2-微球蛋白明顯降低((P<0.05; P<0.01)。
　　 結(jié)論:1.氧化應(yīng)激可能參與