A33啟動(dòng)子介導(dǎo)的溶瘤腺病毒攜帶IL-24對(duì)結(jié)腸襄癌的抗癌作用研究.pdf

1、隨著社會(huì)的發(fā)展和科學(xué)的進(jìn)步,很多疾病已經(jīng)能夠治愈,惡性腫瘤則成為人類致死的頭號(hào)殺手,是國(guó)際科研領(lǐng)域內(nèi)投入最多、研究最深入的疾病之一。結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)作為人類高發(fā)惡性腫瘤,其發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)。在我國(guó),結(jié)直腸癌死亡率已位于惡性腫瘤死亡率的第五位,嚴(yán)重危害人類健康。
　　 2001年,劉新垣院士提出的“癌癥的靶向基因-病毒治療”這一新型腫瘤治療策略,不僅解決了病毒在腫瘤內(nèi)特異性增殖問題,而且融

2、合了治療基因協(xié)同殺傷腫瘤的雙重優(yōu)勢(shì)。溶瘤腺病毒載體的靶向性和攜帶出色的腫瘤治療基因是該策略發(fā)揮最佳療效的關(guān)鍵。腺病毒復(fù)制最重要的元件是其E1區(qū),特別是E1A區(qū),本課題正是利用改造E1A區(qū)序列,將E1A CR2區(qū)的24bp(△24)堿基刪除,則E1A(△24)蛋白質(zhì)不能與Rb結(jié)合,抑制了細(xì)胞周期并促進(jìn)病毒在腫瘤細(xì)胞中選擇性地復(fù)制。黑色素瘤分化相關(guān)基因-7/白介素-24(mda-7/IL-24)作為一種出色的腫瘤治療基因,具有多功能調(diào)節(jié)并誘

3、導(dǎo)癌癥細(xì)胞死亡的作用,由于它對(duì)腫瘤殺傷選擇性高并對(duì)正常細(xì)胞沒有毒害的特點(diǎn)而被用于本課題中。
　　 研究發(fā)現(xiàn),人胃腸道上皮細(xì)胞表面的一種跨膜糖蛋白A33抗原具有很高的腸組織特異性,它已成為臨床上單抗靶向治療結(jié)腸癌研究的熱點(diǎn),而進(jìn)一步研究其基因表達(dá)調(diào)控就有重要意義。這不僅可以從分子水平上闡明A33基因組織特異表達(dá)的機(jī)理,而且通過此研究還能為結(jié)腸癌基因靶向治療提供一種新思路。
　　 本課題首先構(gòu)建一個(gè)由A33啟動(dòng)子調(diào)控的雙靶向

4、結(jié)腸癌特異性增殖溶瘤腺病毒載體Ad.A33-E1A(△24),再在此基礎(chǔ)上攜帶一個(gè)抗癌基因IL-24,構(gòu)成我們策略中提到的靶向基因-病毒Ad(IL-24)·A33-E1A(△24),以期能夠取得很好的抗結(jié)腸癌效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Ad(IL-24)-A33-E1A(△24)有一定的腫瘤殺傷能力,并對(duì)正常細(xì)胞毒副作用非常小,但對(duì)五種結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷作用并未明顯高于其他四種腫瘤細(xì)胞。A33啟動(dòng)子調(diào)控的重組溶瘤腺病毒Ad(IL-24)-A33-

5、E1A(△24)在感染復(fù)數(shù)為10MOI時(shí)對(duì)腫瘤的殺傷效力并不強(qiáng),在感染復(fù)數(shù)為50MOI時(shí),九種細(xì)胞中存活率最低也僅為50％左右。結(jié)果也顯示目的病毒Ad(IL-24)-A33- E1A(△24)比載體病毒Ad.A33- E1A(△24)對(duì)腫瘤的殺傷作用并沒有明顯增強(qiáng)。結(jié)果說明,A33啟動(dòng)子調(diào)控重組腺病毒體外抗結(jié)腸癌特異性不明顯,A33啟動(dòng)子活性不高。A33啟動(dòng)子活性及其調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究,從而改進(jìn)實(shí)驗(yàn)思路,為結(jié)腸癌的靶向基因-病毒治療