香菇中真菌毒素的篩查及發(fā)生規(guī)律研究.pdf

1、香菇（Lentinula edodes）營養(yǎng)價值豐富、味道鮮美，被人們譽(yù)為“菇中之王”、“天然的保健食品”、“植物性食品的頂峰”、“上帝的食品”等稱號，深受廣大消費(fèi)者的青睞。但是香菇在栽培過程中處于溫暖潮濕的環(huán)境中，特別容易受真菌污染。真菌污染除了造成香菇產(chǎn)量損失外，更嚴(yán)重的是能產(chǎn)生對人畜有毒害作用的真菌毒素從而導(dǎo)致人們對香菇產(chǎn)品質(zhì)量安全的擔(dān)憂。因此，香菇中真菌毒素污染是影響其質(zhì)量安全的重要問題。本文首先建立香菇中真菌毒素的檢測方法，對

2、香菇樣品進(jìn)行真菌毒素的篩查，同時，通過對病害香菇進(jìn)行病原菌的分離與鑒定，了解香菇被真菌污染的情況，預(yù)測可能產(chǎn)生真菌毒素的真菌，最后對產(chǎn)毒真菌進(jìn)行產(chǎn)毒規(guī)律研究。為控制香菇中真菌毒素的污染提供理論參考，從而確保香菇產(chǎn)品質(zhì)量的安全。
　　本實(shí)驗(yàn)研究成果主要?dú)w結(jié)為以下三個方面：
　　1.以菇棚病態(tài)香菇、菌棒和市場上的晾干香菇為試驗(yàn)樣本，從病菇中分離主要污染真菌，從而確定香菇中主要污染真菌的菌群，并對真菌的產(chǎn)毒表型進(jìn)行分析。結(jié)果表明：

3、香菇從栽培到貯藏整個過程中污染真菌的種類，主要有哈茨木霉、茄腐鐮刀菌、黑曲霉和黑附球菌等。通過純培養(yǎng)特征、微觀形態(tài)特征、回接感染驗(yàn)證及分子鑒定，確定主要污染真菌的種類為11種。
　　2.本研究針對香菇基質(zhì)，建立了33種真菌毒素LC-MS/MS檢測方法，并對香菇樣品進(jìn)行了真菌毒素篩查，查找在香菇中可能存在的真菌毒素。結(jié)果表明：前處理方法采用了不需要進(jìn)一步凈化的簡單、便宜、快速、有效的QuEChERS方法，色譜柱為Agilent Po

4、roshell120 EC-C18柱（100 mmt Poroshell1），采用線性梯度洗脫，流動相為（A）醋酸銨水溶液和（B）甲醇。方法驗(yàn)證線性（R2≥0.9990），靈敏度(LOQ≤19μg/kg)，回收率(73.6-117.9％)和準(zhǔn)確度(0.8%-18.3%)，此方法成功應(yīng)用于檢測香菇中的多種真菌毒素。30個香菇樣本進(jìn)行篩查，共檢測到4種真菌毒素，濃度從3.3到28819.5μg/kg，為產(chǎn)毒菌株的預(yù)測提供了依據(jù)。
　　

5、3.從香菇中分離得到11株鐮刀菌，且都為茄腐鐮刀菌，通過對來源不同的茄腐鐮刀菌在不同基質(zhì)中隨時間的產(chǎn)毒規(guī)律進(jìn)行探究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：一，三株分離于香菇的茄腐鐮刀在玉米培養(yǎng)基中產(chǎn)生鐮刀菌酸（FA）和伏馬毒素(FB1和FB2)，在大米和香菇中只產(chǎn)生 FB，與對照菌株相比茄腐鐮刀菌在大米和玉米培養(yǎng)基中產(chǎn)毒量很低，在香菇培養(yǎng)基中產(chǎn)毒量較高，而對照菌株產(chǎn)毒卻受到抑制。隨時間的變化，茄腐鐮刀菌在大米培養(yǎng)基和香菇中產(chǎn)毒有顯著差異（P<0.05）；在玉米培養(yǎng)

6、基中產(chǎn)毒無顯著差異（P>0.05）。二，三株分別分離于香菇、青椒、玉米的茄腐鐮刀菌在不同培養(yǎng)基中隨時間的產(chǎn)毒規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)：在大米培養(yǎng)基中，分離于香菇和青椒的菌株不產(chǎn)生 FA，只產(chǎn)生 FB，隨時間變化產(chǎn)毒量有顯著差異（P<0.05）；分離于玉米的菌株不產(chǎn) FA，只產(chǎn) FB，隨時間的變化產(chǎn)毒量無顯著差異（P>0.05）。在玉米培養(yǎng)基中，分離于香菇、玉米、青椒的菌株產(chǎn)生 FA和FB，隨時間的變化產(chǎn)毒量無顯著差異（P>0.05），三株菌株產(chǎn)毒總