nucleostemin基因在腎癌中的表達及其與腫瘤增殖活性的關系.pdf

1、[目的]腎癌也被稱為腎細胞癌(renalcellcarcinoma，RCC)，是最常見的腎實質(zhì)惡性腫瘤，也是泌尿系統(tǒng)最為常見的腫瘤之一，在我國泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中發(fā)病率僅次于膀胱癌，約占成年人全身惡性腫瘤的3％，而在原發(fā)腎臟惡性腫瘤中可占85％～90％，是一種嚴重危害人類健康的惡性腫瘤。腎癌的發(fā)生機制十分復雜，具體、特定的病因至今尚不十分明確。腎癌的發(fā)病機理及發(fā)生、發(fā)展的分子生物學基礎至今亦尚不明了，其分子生物學行為復雜多變。目前，人

2、們對腎癌相關的分子標志物及其表達產(chǎn)物的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)了大量的腎癌相關基因及其表達產(chǎn)物。近年來，腫瘤細胞生物學及分子生物學的進展越來越大的幫助了人們對腫瘤發(fā)生、發(fā)展機制的認識，也為臨床上對腫瘤的進一步診斷和治療提供了有用的參考，并為將來更好的診斷和治療腎癌提供了廣闊的前景。nucleostemin是2002年Tsai等報道的一種新的p53結(jié)合蛋白，定位于干細胞和腫瘤細胞的細胞核，參與干細胞和腫瘤細胞的增殖調(diào)控，能維持干細胞的擴增并抑制

3、其向成熟細胞分化。這引發(fā)了人們對干細胞和腫瘤相關性的高度關注。由此，nucleostemin成為在調(diào)節(jié)干細胞和腫瘤細胞的增殖與分化中令人非常感興趣的蛋白，現(xiàn)在nucleostemin已被作為干細胞的標記。并且有人提出干細胞與癌細胞均能不斷的自行復制，其背后的分子機制可能是相同的：干細胞與癌細胞的增生，均由nucleostemin蛋白質(zhì)來決定其細胞復制的能力。增殖細胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，

4、PCNA)是近年來研究比較多的一種在細胞周期S期廣泛表達的一種非組蛋白型核蛋白，PCNA的陽性程度可直接反映DNA復制的活躍程度，可作為研究細胞增殖狀態(tài)的一項重要指標。nucleostemin基因與腎癌發(fā)生、發(fā)展的關系目前尚不清楚，有關這方面的報道尚未見報道，因此本實驗采用RT-PCR的方法從RNA水平研究nucleostemin基因在腎癌組織中的表達；應用免疫組化方法研究PCNA蛋白的表達，從而明確腎癌組織中nucleostemin基

5、因的表達與腫瘤增殖活性的關系。探討nucleostemin基因在腎癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，試圖為腎癌的防治提供實驗依據(jù)，針對腎癌細胞過度增殖尋找臨床治療和預防的途徑具有重要意義。 [材料與方法]收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科2003年11月至2005年8月期間手術切除的腎癌組織標本62例。其中男性患者35例，女性患者27例，年齡在29歲～78歲之間，平均56.6歲。組織類型：透明細胞型50例，顆粒細胞型12例。Robson分期：

6、Ⅰ期17例，Ⅱ期22例，Ⅲ期18，Ⅳ期5例。按Thoenes分級標準進行病理分級：G1、G2、G3級分別為13例、27例、22例。同時取10例癌旁非癌腎組織和10例非瘤正常腎組織作對照組。癌旁非癌腎組織取自距瘤緣2cm以上。所有標本患者術前均未行放化療、免疫治療及腎動脈栓塞治療；所有標本均經(jīng)病理證實。全部標本取一半新鮮組織放于EP管中，液氮浸泡10分鐘后，保存于-80℃冰箱，用于RT-PCR；另一半組織用福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，

7、4μm厚連續(xù)切片。利用RT-PCR方法以GAPDH為內(nèi)參照，檢測上述組織nucleostemin基因mRNA的表達，使用小鼠抗人PCNA單克隆抗體，通過通用型二步免疫組化染色法，檢測PCNA抗原在62例RCC組織及20例正常腎組織中的表達。統(tǒng)計分析采用SPSS10.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，a=0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的檢驗標準。 [結(jié)果]1.nucleostemin基因陽性表達表現(xiàn)為在RT-PCR凝膠成像中，在570bp位置

8、顯示一條條帶，陰性表達表現(xiàn)為僅有內(nèi)參(GAPDH)的條帶。在62例腎癌組織中，nucleostemin基因47例顯示陽性表達，陽性率為75.81％。正常腎組織未見有nucleostemin基因陽性表達。nucleostemin基因在腎癌組織中的陽性表達顯著高于正常腎組織，二者比較差異性具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。nucleostemin基因在透明細胞癌中陽性表達率為74.00％；顆粒細胞癌陽性表達率為83.33％，二者相比較差異性

9、不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。nucleostemin基因表達率隨著腎癌臨床分期升高而增加，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期的表達率分別是52.94％、68.18％、100.00％、100.00％。合并Ⅲ期、Ⅳ期進行比較，三者之間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.002)；Ⅰ期與Ⅲ及Ⅳ期之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)，Ⅱ期與Ⅲ及Ⅳ期之間差異亦具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)。nucleostemin基因在病理分級G1、G2、G3中的陽性

10、表達率分別為46.15％、77.78％、90.91％，三者之間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011)，G1與G3之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)。 2.腎癌組織中，PCNA蛋白表達的陽性信號主要定位于癌細胞胞核，表現(xiàn)為細胞核呈棕褐色，并且陽性細胞呈片狀分布，62例中有44例顯示陽性表達，陽性率為70.97％。正常腎組織PCNA蛋白的陽性表達，陽性表達細胞在腎小管或/和腎小球細胞中也呈片狀分布。20例正常腎組織中有3例PCN

11、A蛋白呈陽性表達，陽性率為15.00％。PCNA蛋白在腎癌組織中的陽性表達顯著高于正常腎組織，二者差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。PCNA蛋白透明細胞癌與顆粒細胞癌組織中的陽性表達率分別為72.00％、66.67％，二者相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。PCNA蛋白在腎癌的臨床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期中的陽性表達率分別為52.94％、59.09％、94.44％、100.00％，表達率隨著腎癌臨床分期升高而增加，合并Ⅲ期、Ⅳ期

12、進行比較，三者之間差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.004)；Ⅰ期與Ⅲ及Ⅳ期之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)，Ⅱ期與Ⅲ及Ⅳ期之間差異亦具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)。PCNA蛋白在病理分級G1、G2、G3中的陽性表達率分別為23.08％、74.07％、95.45％，三者之間差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)；G1與G2之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)，G1與G3之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0167)。 3

13、.在62例腎癌組織中，nucleostemin基因和PCNA蛋白二者表達共陽性39例，共陰性10例；nucleostemin基因呈陽性表達，PCNA蛋白陰性表達的8例；nucleostemin基因呈陰性表達，PCNA蛋白陽性表達的5例。二者在腎癌組織中的表達呈正相關關系(P＜0.05)。 [結(jié)論]1.nucleostemin基因在腎癌組織中呈高表達，而在正常腎組織中無表達；nucleostemin基因的表達可能與病理類型無關，而

14、與臨床分期、病理分級有關，在晚期腎癌中的表達顯著高于早、中期腎癌，高分級腫瘤高于低分級腫瘤，提示nucleostemin基因的表達與腎癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，可以作為評價腎癌惡性程度的指標之一。 2.PCNA在腎癌組織中呈高表達，在正常腎組織中表達降低，PCNA的表達可能與病理類型無關，而與病理分級、臨床分期有關，在晚期和較高分級腎癌中的表達高于中、早期和較低分級的腎癌，提示PCNA的表達可以作為評價腎癌增殖活性的指標之一。