組織工程皮的構(gòu)建和生物安全性研究.pdf

1、目的：皮膚是人體最大的器官，具有高度復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和功能，有重要的屏障和保護(hù)作用，不僅能防止外界刺激損傷體內(nèi)的組織、阻擋異物和病原體侵入，而且可以阻止體液外滲和對外界物質(zhì)的吸收，還具有調(diào)節(jié)體溫、參與免疫應(yīng)答等作用。燒傷、創(chuàng)傷、糖尿病潰瘍、褥瘡等原因都會導(dǎo)致皮膚缺損或功能缺失，不僅造成患者肉體痛苦，也給患者造成心靈的創(chuàng)傷。各種原因造成的皮膚缺損，尤其是大面積燒傷患者常常因不能及時(shí)植皮、有效的修復(fù)創(chuàng)面而導(dǎo)致創(chuàng)面感染、體液丟失、臟器功能不全等與皮

2、膚缺損相關(guān)的并發(fā)癥，甚至死亡。因此，臨床上需要盡快修復(fù)創(chuàng)面以減少機(jī)體損耗、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、防止微生物入侵，以預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生都非常重要。盡管大面積燒傷病人的治療已取得很大進(jìn)展，但如何早期覆蓋創(chuàng)面、迅速恢復(fù)皮膚的屏障功能一直因?yàn)槿狈线m的創(chuàng)面覆蓋物而成為治療中必須解決的最迫切的問題。因此，皮膚創(chuàng)面覆蓋物或組織工程皮膚受到了越來越多的重視。我們本研究的目的是構(gòu)建組織工程皮并對其生物安全性進(jìn)行初步的研究評價(jià)。
　　 方法：1、組

3、織工程皮的構(gòu)建：無菌條件下取正常人體包皮或耳后皮膚，經(jīng)分離培養(yǎng)得到皮膚表皮角質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，將成纖維細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞同時(shí)接種在生物支架材料上，37℃，5％CO2培養(yǎng)10～14天經(jīng)活性檢測合格后即可使用。
　　 2、組織工程皮的生物安全性研究：主要進(jìn)行了組織工程皮的皮膚刺激試驗(yàn)、致敏性試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、植入試驗(yàn)以及熱原、支原體的檢查。其評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)》進(jìn)行評定。
　　 結(jié)果：1

4、、組織工程皮的構(gòu)建：角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)3～5天后并向四周擴(kuò)展，可增殖形成集落，成纖維細(xì)胞分散培養(yǎng)24h后，部分細(xì)胞鋪展成梭形，匯合成片后細(xì)胞呈梭形、束狀排列，也有部分呈不規(guī)則形，細(xì)胞間以細(xì)長突起相互交聯(lián)。組織工程皮在培養(yǎng)10～14天后，具有表皮、真皮雙層結(jié)構(gòu)，且具有細(xì)胞活性。
　　 2、組織工程皮的生物安全性研究：組織工程皮的皮膚刺激試驗(yàn)原發(fā)刺激指數(shù)為0.25<0.4，未見任何刺激反應(yīng)，無紅斑、焦痂、水腫等皮膚反應(yīng)現(xiàn)象，致敏性試驗(yàn)

5、、急性毒性試驗(yàn)以及熱原、和支原體的檢查結(jié)果均為陰性，細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果脫色指標(biāo)/溶解指標(biāo)：陰性對照0/0，樣品0/0，陽性指標(biāo)4/5。溶血試驗(yàn)中溶血率小于2.5％，且陰性對照管的吸光度不大于0.03；陽性對照管的吸光度值為0.8±0.3。植入試驗(yàn)中的植入物對大鼠創(chuàng)口愈合無影響，植入物逐漸被大鼠吸收。
　　 結(jié)論：1、角質(zhì)形成細(xì)胞與成纖維細(xì)胞混合接種在生物載體膜上，經(jīng)培養(yǎng)后增殖分化，可以擴(kuò)大皮源，為大面積深度燒傷患者提供了皮源。利用