奧美拉唑膠囊人體藥代動(dòng)力學(xué)研究及其代謝酶CYP2C19基因型的檢測(cè).pdf

1、第一部分奧美拉唑膠囊人體生物等效性及藥代動(dòng)力學(xué)研究 第一節(jié)血漿奧美拉唑濃度測(cè)定方法的建立 本實(shí)驗(yàn)旨在建立測(cè)定人血漿奧美拉唑濃度的反相高效液相色譜法。采用二氯甲烷萃取血漿樣品：樣本血漿加入磷酸緩沖液(pH10.0)及二氯甲烷，混勻，萃取后取下層有機(jī)相，濃縮復(fù)溶后進(jìn)樣分析。色譜柱為SymmetryShieldC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為0.02mol/L磷酸二氫鉀(pH7.2)-乙腈(73∶27)，流

2、速1.00mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)302nm。內(nèi)標(biāo)法峰面積比定量。在此條件下，奧美拉唑血漿濃度在6.65～1330μg·L-1呈良好的線性關(guān)系，低、中、高三種濃度的絕對(duì)回收率分別為73.33％、75.16％和70.77％，相對(duì)回收率分別為101.66％、106.89％、101.67％，日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)均小于15％。最低檢測(cè)限為6.65μg·L-1。該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適用于奧美拉唑人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。 第二節(jié)奧美拉唑

3、膠囊的相對(duì)生物利用度及生物等效性研究 采用兩制劑雙周期交叉設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)。22名男性健康志愿者隨機(jī)分成兩組，分別單劑量口服奧美拉唑膠囊40mg，一組受試者先服用試驗(yàn)藥品，后服用對(duì)照藥品；另一組受試者先服用對(duì)照藥品，后服用試驗(yàn)藥品。試驗(yàn)分成兩周期進(jìn)行，兩周期間間隔1周。采用反相高效液相色譜法測(cè)定血藥濃度，用DAS2.0計(jì)算各受試者的有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及相對(duì)生物利用度F值，采用方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(1-2α)可信區(qū)間分別對(duì)試驗(yàn)藥品

4、和對(duì)照藥品的AUC和Cmax等參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用非參數(shù)檢驗(yàn)對(duì)Tmax進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，然后作出生物等效性評(píng)價(jià)。 第三節(jié)奧美拉唑膠囊的人體藥代動(dòng)力學(xué)研究 從奧美拉唑膠囊人體生物等效性試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，有兩名健康志愿者的藥時(shí)曲線下面積比同組其他健康志愿者的藥時(shí)曲線下面積平均值高出2～5倍，導(dǎo)致AUC值個(gè)體差異大，AUC標(biāo)準(zhǔn)差達(dá)均值80％以上，方差分析表明個(gè)體間的差異顯著。我們?cè)贏UC的均值±SD的范圍內(nèi)用單純隨機(jī)抽樣法篩選出7名

5、健康志愿者，用DAS2.0藥代動(dòng)力學(xué)批處理程序計(jì)算這7名男性健康志愿者口服奧美拉唑膠囊40mg的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，與前2名健康志愿者比較。結(jié)果表明這7名受試者單次口服奧美拉唑膠囊40mg的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：AUC0→121530.2±1035.7μg·h·L-1，AUC0→∞1562.6±1048.9μg·h·L-1，T1/21.05±0.28h，CL/F0.64±0.41L·h-1·kg-1；而這2名受試者單次口服奧美拉唑膠囊40m

6、g的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為：AUC0→128897.8±4485.2μg·h·L-1，AUC0→∞9850.6±4938.5μg·h·L-1，T1/22.03±0.01h，CL/F0.23±0.11L·h-1·kg-1。兩名受試者的AUC0→12、AUC0→∞，均顯著高于另7名受試者的均值約2～5倍，T1/2延長(zhǎng)，清除率CL/F降低。奧美拉唑在這兩名受試者的體內(nèi)過(guò)程與其他受試者存在顯著差異。 第二部分奧美拉唑的主要代謝酶CYP

7、2C19基因型的檢測(cè) 采用PCR結(jié)合限制性?xún)?nèi)切酶技術(shù)進(jìn)行CYP2C19基因型檢測(cè)。抽取外周靜脈血2ml,采用全血DNA提取試劑盒提取基因組DNA。鑒定ml型突變基因時(shí)，根據(jù)CYP2C19等位基因的第4個(gè)內(nèi)含子和第5個(gè)外顯子連接處兩側(cè)的堿基序列合成其特異性PCR引物，用限制性?xún)?nèi)切酶SmaI消化其PCR產(chǎn)物，然后進(jìn)行凝膠電泳分析。檢測(cè)m2型突變基因則根據(jù)CYP2C19等位基因的第4個(gè)外顯子兩端的內(nèi)含子堿基序列合成其特異性的PCR引物