晝夜節(jié)律紊亂對成體乳腺干細胞的影響.pdf

1、2007年，WHO國際癌癥研究所確認，倒班能夠引起人體生理節(jié)奏紊亂，是人類可能的致癌危險因素（2A級）。其中影響倒班工人生理節(jié)奏紊亂的重要危險因素是夜光暴露，長期夜光暴露引起人體內激素分泌紊亂，可能導致各種癌癥及其他疾病發(fā)生。近年來，晝夜節(jié)律紊亂作為乳腺癌的危險因素之一，已經受到廣泛的關注。多項流行病學研究發(fā)現(xiàn)，女性長期晝夜節(jié)律紊亂，其乳腺癌的發(fā)病危險性增高，但其致病機制尚未確定。
　　目的：
　　本研究模擬日常生活中晝夜節(jié)

2、律紊亂，將兩月齡Balb/c小鼠進行長期光照暴露，通過研究激素水平，乳腺表觀形態(tài)，乳腺干細胞數(shù)量和功能以及蛋白水平的變化來探討晝夜節(jié)律紊亂與乳腺癌的關系。
　　方法:
　　本研究光照方案參照國內外最新的輪班制度，共分為四個組:L/D對照組(光照08:00-20:00，黑暗20:00-08:00); D/L處理組(光照20:00-08:00，黑暗08:00-20:00); Shift處理組（周一:光照08:00-15:00，黑

3、暗15:00-08:00;周二:光照15:00-22:00，黑暗22:00-08:00;周三:光照08:00-15:00，黑暗15:00-08:00;周四，周五:光照22:00-08:00，黑暗08:00-22:00;周六，周日:光照08:00-20:00，黑暗20:00-08:00）;LL處理組(光照:13:00-09:00，黑暗09:00-13:00)。兩月齡的Balb/c小鼠隨機分成四個組后進行8個月長期光照暴露，實驗終止時間為光

4、照8個月立即處理和滯后兩個月處理。
　　本實驗研究內容分為兩部分:
　　第一部分研究晝夜節(jié)律紊亂對小鼠生殖器官，乳腺表觀形態(tài)，激素水平和蛋白水平的影響。
　　第二部分是對乳腺干細胞進行體外定性和定量分析，以查看長期晝夜節(jié)律紊亂對乳腺干細胞數(shù)量和比例的影響。同時，利用乳腺干細胞體內移植再生實驗來驗證長期晝夜節(jié)律紊亂對乳腺干細胞功能的影響。
　　結果:
　　本研究第一部分結果顯示，光照8個月立即處理的小鼠，卵巢

5、重量明顯減少，在LL處理組中顯著性減少，而在滯后效應中又得到恢復，在滯后效應中，D/L，Shift處理組子宮重量顯著性增加。激素水平結果顯示，D/L處理組睪酮，去甲腎上腺素含量顯著性增加，Shift處理組雌二醇，腎上腺素含量顯著性增加;滯后效應中，D/L處理組睪酮含量顯著性增加，LL處理組血管緊張素Ⅱ顯著性增加。乳腺分支點和導管增生在D/L，Shift處理組中都顯著性增加，且在滯后效應中不可恢復。細胞因子檢測結果表明，三個處理組中G-C

6、SF都顯著性減少，而IGF-BP-3都顯著性增加，LIX在D/L，LL處理組中顯著性增加，PF4在Shift，LL處理組中顯著性增加，Shift處理組中MIG，IL1-alpha顯著性增加，LL處理組中Eotaxin-2顯著性減少。免疫組化實驗結果表明，處理組中COX2，ER，PR陽性表達率均大于對照組。
　　第二部分結果顯示，長期晝夜節(jié)律紊亂使得小鼠乳腺上皮細胞數(shù)目和比例減少。Shift處理組干細胞比例明顯增加，LL處理組干細胞

7、比例明顯減少。經流式細胞儀分選的細胞群形成的乳腺微球種植在基底膜基質中能夠進一步分化形成特定的3D結構，體內移植再生實驗證明這些3D結構能夠生成新的再生乳腺。而三個處理組移植再生率都有所降低，Shift處理組中再生乳腺組織增生比例顯著性增加。滯后效應中，D/L，Shift處理組再生乳腺組織增生比例顯著性增加。
　　結論:
　　晝夜節(jié)律紊亂增加小鼠體內性激素水平，減緩生殖器官的發(fā)育，增加乳腺側枝形成和乳腺導管增生。改變小鼠乳腺