豬橫紋肌高表達(dá)新基因的克隆、定位、表達(dá)譜分析及SNPs與經(jīng)濟(jì)性狀和肌纖維性狀的關(guān)系研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高,人們對豬肉品質(zhì)的要求也越來越高,如何提高肉質(zhì)是當(dāng)前畜牧業(yè)發(fā)展的主要任務(wù)之一。而以往的研究大都集中在肉質(zhì)的表觀指標(biāo)的分析以及屠宰后肉品的加工上,而對影響肉質(zhì)好壞的分子機(jī)理研究較少。因此,研究影響肉質(zhì)的分子機(jī)理是非常重要的,特別是研究肌纖維的形成及其組成的分子機(jī)理,不僅可以幫助人們了解動物肌肉生長發(fā)育的一般模式,而且可以從動物生長發(fā)育過程中,從肌肉的形成開始,通過適當(dāng)?shù)耐緩秸{(diào)控肌肉生長來改善肉質(zhì)。
　　 本研

2、究利用生物信息學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法,在豬中克隆和定位了四個在橫紋肌中高表達(dá)的基因,并作了一些初步的功能研究與預(yù)測,取得了如下結(jié)果:
　　 1.結(jié)合豬EST數(shù)據(jù)庫的信息和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)的方法,鑒定了豬ANKRD2基因的全長cDNA序列,并得到了ANKRD23和ASB15兩個基因的部分cDNA序列。同時利用生物信息學(xué)方法對ANKRD2,ANKRD23,ASB15三個基因的CDS全長序列進(jìn)行了分析,推導(dǎo)其氨

3、基酸序列和可能的功能域,為進(jìn)一步研究基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 2.利用體細(xì)胞雜種板(SCHP)和輻射雜種板(IMpRH)對ANKRD1,ANKRD2,ANKRD23和ASB15四個基因進(jìn)行了染色體區(qū)域定位。將PCR分型數(shù)據(jù)提交到在線數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果表明ANKRD1被定位在SSC14,與SW1552緊密連鎖(LOD=5.26)；ANKRD2也被定位在SSC14,與SW328緊密連鎖(LOD=10.44)；ANKR

4、D23定位在SSC3q12,與IGKC緊密連鎖(LOD=6.03)；ASB15定位在SSC18q13-21,與SW1984緊密連鎖(LOD=6.84)。以上四個基因所在的區(qū)域都存在與生長、肉質(zhì)或肌纖維性狀相關(guān)的QTL。
　　 3.用半定量RT-PCR的方法,對ANKRD1基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜研究,對ANKRD2,ANKRD23和ASB15三個基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜和時期表達(dá)譜分析。結(jié)果表明除ANKRD23外其他三個基因都只在心肌和

5、骨骼肌中特異表達(dá),而ANKRD23還要在褐色脂肪中表達(dá),表明這四個基因在心肌和骨骼肌中都有重要的生理功能；ANKRD2,ANKRD23和ASB15三個基因在肌肉生長發(fā)育的不同時期存在差異表達(dá),都是隨著時間的推移表達(dá)量增加,可能參與了肌肉的生長發(fā)育過程。
　　 4.運(yùn)用Real-time Q-PCR技術(shù),在通城和長白兩個豬種中對ANKRD2進(jìn)行了骨骼肌發(fā)育不同階段的表達(dá)模式的分析。結(jié)果表明在33天左右ANKRD2表達(dá)量很低,在隨后

6、65天至90天左右表達(dá)量逐漸升高。從不同豬種的表達(dá)情況來看,從65天至90天的這段發(fā)育時期,該基因在長白豬中表達(dá)量顯著增加(P<0.05),而在通城豬中表達(dá)量的增加相對比較平穩(wěn),表明該基因在通城和長白豬中表達(dá)量存在差異。
　　 5.對ANKRD2基因進(jìn)行了SNPs的檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了ANKRD2基因第五外顯子和第八外顯子具有ANKRD2-HaeⅢ(C-T)和ANKRD2-Mbol(C-T)兩個酶切位點(diǎn)。利用PCR-RFLP方法檢測

7、了這兩個SNPs在杜洛克、二花臉豬、清平豬、玉山黑豬、梅山豬、大花白豬和藏豬中的基因型分布。同時進(jìn)行了群體遺傳學(xué)分析,卡方檢驗(yàn)結(jié)果表明,這兩個SNPs位點(diǎn)的基因型頻率在不同的品種中存在較大的差異。
　　 6.在我室與通城縣畜牧局合作組建的試驗(yàn)豬群中,采用方差分析的最小二乘分析法,利用廣義線性模型對上述兩個SNP位點(diǎn)與部分經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行了初步的關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),ANKRD2基因第五外顯子的HaeⅢ多態(tài)性與肌內(nèi)脂肪含量有極顯著的關(guān)聯(lián)