rAAV2介導(dǎo)的靶向HIF-2α的siRNA增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞對(duì)健擇敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察攜帶靶向HIF-2α基因的shRNA的2型重組腺相關(guān)病毒對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡作用及其對(duì)化療藥物健擇的增敏作用。 方法：將rAAV2-EGFP-U6- HIF-2α-siRNA轉(zhuǎn)染入人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中，以綠色熒光蛋白(GFP)基因?yàn)閳?bào)告基因，用熒光顯微鏡儀和流式細(xì)胞觀察病毒轉(zhuǎn)染效率。分別在常氧和缺氧條件下培養(yǎng)細(xì)胞，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)、免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)PANC-1細(xì)胞HIF-2α mRNA和蛋白

2、表達(dá)，MTT法檢測(cè)不同濃度的化療藥物健擇對(duì)PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用，MTT法檢測(cè)缺氧條件下rAAV2-EGFP- U6-HIF-2α-siRNA聯(lián)合化療藥物健擇對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖能力的影響，Annexin V-FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA被成功地轉(zhuǎn)染入PANC-1細(xì)胞中，F(xiàn)CM測(cè)定轉(zhuǎn)染效率在40％左右。與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組PANC-1細(xì)胞的

3、HIF-2α mRNA和蛋白的表達(dá)明顯受到抑制。不同濃度的健擇(0.25μ g/mL-4μ g/mL)作用48小時(shí)后均對(duì)細(xì)胞增殖有抑制作用，并隨劑量的增加抑制率逐漸增大(F=859.054，P<0.05)，相同藥物濃度下，常氧下的細(xì)胞抑制率大于缺氧條件下的細(xì)胞抑制率(F=219.471，P<0.05)。在缺氧狀態(tài)下，聯(lián)合組對(duì)PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率顯著高于單純轉(zhuǎn)染組和單用健擇組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=39.279，P<0.05)，