螺旋毛殼ND35幾丁質(zhì)酶的鑒定及其對灰霉病的生防作用.pdf

1、螺旋毛殼Chaetomium spirale ND35分離自健康的毛白楊，是一株很有開發(fā)潛力的內(nèi)生生防真菌，可用于防治多種真菌病害。灰霉病是多種果樹蔬菜的重要病害之一，在20世紀70年代后期灰霉病發(fā)展迅速，危害日趨嚴重。近來研究表明灰霉病在很多地區(qū)已產(chǎn)生嚴重的抗藥性，而不斷增加的用藥量和劇毒農(nóng)藥的使用給社會帶來了嚴重的負面效應(yīng)，生物防治已在世界范圍內(nèi)越來越受到人們的關(guān)注，用生物防治方法來防治灰霉病已成為刻不容緩的問題。 本論文以

2、菜豆——灰霉病菌(Botrytis cinerea)為模式系統(tǒng)，系統(tǒng)研究了C．spiraleND35幾丁質(zhì)酶的誘導(dǎo)、純化及其性質(zhì)，以及對菜豆灰霉病菌的作用機制、可行性和應(yīng)用方法，闡明了幾丁質(zhì)酶在灰霉病生物防治中的作用。為進一步在大田中應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1．離體對峙培養(yǎng)和顯微觀察，顯示了螺旋毛殼ND35對菜豆灰霉病菌有強烈的拮抗作用；以膠體幾丁質(zhì)誘導(dǎo)的粗酶液對菜豆灰霉病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)有明顯的抑制作用，

3、對離體葉片及盆栽植株也均表現(xiàn)出良好的防治效果。 2．對內(nèi)生真菌螺旋毛殼(C．spirale)ND35幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)酶條件，及其不同碳、氮源的調(diào)控作用進行了系統(tǒng)研究，結(jié)果表明，楊樹腐爛病菌(Valsasordida)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和小麥紋枯病菌(Rhizoctonia cereali)等真菌的細胞壁制備物，膠體幾丁質(zhì)和昆布多糖，均可誘導(dǎo)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶，其中昆布多糖為誘導(dǎo)物酶活力最強；其次

4、為膠體幾丁質(zhì)。 3．內(nèi)生菌螺旋毛殼(C．spirale)ND35通過在SMCS液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，獲得了具幾丁質(zhì)酶活性的粗酶液。經(jīng)硫酸銨沉淀、DEAE-Sepharose陰離子交換層析及Phenyl-Sephar。ose疏水層析，并通過SDS-PAGE鑒定，純化了一種分子量約為42 kDa的幾丁質(zhì)酶Chit42。純化倍數(shù)為10.03，回收率為7.10％。 4．純化的幾丁質(zhì)酶Chit42，其最適反應(yīng)溫度為40℃，在30℃