豆豉纖溶酶產(chǎn)生菌的篩選、培養(yǎng)及微生態(tài)制劑的研究.pdf

1、本文以從豆豉中得到產(chǎn)纖溶酶活性較高的菌株并將其保存為目的，利用纖維蛋白平板篩選和纖溶活性測定相結(jié)合的方法進(jìn)行菌株篩選，通過生理生化特征分析和16SrDNA擴(kuò)增及序列測定的方法進(jìn)行菌種鑒定，選用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法進(jìn)行產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，采用真空冷凍干燥的方法將菌株制成微生態(tài)制劑。
　　 通過篩選得到兩株纖溶活性較高的菌株，分別是纖溶活性為372.3IU/mL的3號菌株和纖溶活性為287.7IU/mL的9號菌株。對3號菌株

2、和9號菌株進(jìn)行形態(tài)、生理、生化鑒定，初步鑒定3號菌株和9號菌株為枯草芽孢桿菌。再將3號菌株進(jìn)行16S rDNA擴(kuò)增及序列測定，進(jìn)一步確定3號菌株為枯草芽孢桿菌。
　　 通過對3號菌株培養(yǎng)基的優(yōu)化，確定最佳碳源為大米粉，最佳氮源為酵母膏，最佳碳氮比為1：1，且碳源和氮源的濃度分別為2％。通過對離子組成和培養(yǎng)基的正交試驗(yàn)，確定最佳培養(yǎng)基配方為大米粉2％，大豆粉2％，酵母膏0.8％，麩皮0.75％，K2HPO40.4％，KH2PO40

3、.3％,CaCl20.02％,MgSO40.07％。
　　 通過對發(fā)酵工藝條件優(yōu)化，確定3號菌株的最佳發(fā)酵條件：初始pH值為7.5，發(fā)酵時(shí)間為72h，接種量為4％，搖瓶裝液量為30mL（250mL搖瓶），培養(yǎng)溫度為34℃，搖床轉(zhuǎn)速為180r/min。按照確定的培養(yǎng)基配方和發(fā)酵工藝條件對3號菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，測定420nm處的OD值、pH值和纖溶活性，確定菌體生長和產(chǎn)酶過程并不是同步的，菌體產(chǎn)酶的過程要滯后于菌體的生長過程。

4、>　　 通過耐受性試驗(yàn)，確定3號菌株對高溫、酸堿和膽汁均有一定的耐受性，具有制備微生態(tài)制劑的可行性。3號菌株經(jīng)真空冷凍干燥制成菌粉，確定最佳單因素保護(hù)劑為甘油6％，其添加量為保護(hù)劑∶菌液=1∶2（體積比）。通過正交試驗(yàn)確定最佳保護(hù)劑配方為甘油6％，麥芽糖8％，脫脂乳15％，蔗糖8％。將凍干菌粉分別在常溫、冷藏(4℃)和凍藏（-20℃）條件下貯存，最終確定冷藏(4℃)狀態(tài)下保存菌粉的效果最好，經(jīng)過六個(gè)月的保存期后，其活菌存活率可達(dá)47.