蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及活力的測定

1、蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及活力的測定蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及活力的測定作者作者劉艷芝劉艷芝指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師張玲秀張玲秀（忻州師范學(xué)院生物系（忻州師范學(xué)院生物系1201班034000）摘要摘要：采用忻州師范學(xué)院校園附近土壤、農(nóng)田土壤及體育場土壤作為樣品，并從中篩選分離并得到產(chǎn)蛋白酶能力較高的菌株，經(jīng)過初步鑒定該菌株屬芽孢桿菌。通過對其產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果顯示該菌產(chǎn)酶最佳碳源為質(zhì)量濃度15gL的乳糖，最佳氮源為質(zhì)量濃度20gL的尿素，最適初始pH值

2、為6.5，最適發(fā)酵溫度為35℃。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：菌種篩選；鑒定；蛋白酶；條件優(yōu)化蛋白酶蛋白質(zhì)中肽鍵水解的酶，是一類廣泛應(yīng)用于皮革、毛皮、絲綢、醫(yī)藥、食品、釀造等方面的重要工業(yè)用酶，也是目前世界上產(chǎn)銷量最大的商業(yè)酶，其市場占有率約占整個商品酶銷售量的60％，微生物蛋白酶從微生物中提取，不受資源、環(huán)境和空間的限制，具有動物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比擬的優(yōu)越性。目前，蛋白酶的研究仍注重于新品種的發(fā)掘，并通過分離篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化和誘變育種或構(gòu)建

3、基因工程菌等綜合手段獲得高產(chǎn)蛋白酶的優(yōu)良菌株。我國的蛋白酶研究還存在如微生物資源開發(fā)不足，蛋白酶種類較少，酶制劑品種單一等問題。本論文從以下幾方面對蛋白酶產(chǎn)生菌株進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究：從土壤中篩選出產(chǎn)蛋白酶能力較高菌株。對篩選出的菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)的鑒定，將菌株初步確定到屬。研究產(chǎn)蛋白酶菌株發(fā)酵產(chǎn)酶條件，對培養(yǎng)基成分和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件，進(jìn)一步提高菌株的產(chǎn)酶活力。1、材料及方法：1.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)儀器：高壓滅

4、菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺，電子分析天平，pH測量儀，水浴鍋，微波爐，紫外光可見分光光度計(jì)，搖床、酒精燈、接種針、游標(biāo)卡尺、無菌移液管、無菌試管、量筒、容量瓶、漏斗、試劑瓶、漏斗、載玻片、濾紙、擦鏡紙。1.2實(shí)驗(yàn)材料：樣品：取自忻州師范學(xué)院附近的土壤。試劑：無菌水（帶玻璃珠）、100ugml酪氨酸溶液、PH8.0硼酸緩沖液、0.4molL三氯乙酸、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、酪蛋白培養(yǎng)基、產(chǎn)蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基二、操作步驟（一）配制所需培養(yǎng)基按照

5、以下配方配制所需的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，瓊脂1.5～2.0g，水100ml，pH7.2，配制200mL酪蛋白培養(yǎng)基：牛肉膏0.3g，酪素1g，NaCl0.5g，瓊脂2g，定容于100ml產(chǎn)蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉6g，豆粉4g，磷酸二氫鉀0.03g，碳酸鈉0.1g，磷酸氫二鈉0.4g，定容于100ml（二）分離4.計(jì)算酶活力以1min內(nèi)有酪蛋白釋放的三氯乙酸可溶物在275nm的吸光值于1

6、ug酪氨酸相當(dāng)時，其所需要的酶量為1個單位。酶活（酶活（Uml）=nA10AA201??nA10AA201??式中，10——反應(yīng)時間10minA1————酶反應(yīng)可溶物的吸光值，A0————空白對照可溶物的吸光值，A2————1ugml酪氨酸的吸光值實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析：實(shí)驗(yàn)所測標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)如下：試管號0123456酪氨酸的濃度（ugml）0102030405060A275下的吸光值00.0210.0280.0360.0460.0570.0