動(dòng)植物蛋白酶等酶活力的共振散射光譜測(cè)定.pdf

1、第一部分: 緒論。介紹了共振散射技術(shù)理論及其在生化分析研究中的應(yīng)用。介紹了木瓜蛋白酶、糜蛋白酶等五種蛋白酶活力測(cè)定的方法。綜述了溶菌酶、辣根過(guò)氧化物酶的分析進(jìn)展。 第二部分: 酪蛋白締合微粒的共振散射光譜研究及其在木瓜蛋白酶活力測(cè)定中的應(yīng)用在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，木瓜蛋白酶催化水解酪蛋白(casein)，剩余底物casein分別與三氯乙酸(TCA)、十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)、十二烷基硫酸鈉(SDS)結(jié)合形成締合微粒。該微粒在360

2、 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm處產(chǎn)生5個(gè)共振散射峰，其中最強(qiáng)峰均位于470 nm。對(duì)于TCA-Casein-Papain 、SDBS-Casein-Papain、SDS-Casein-Papain三個(gè)體系，Papain的酶活力分別在0.024～4.8、0.048～4.8、0.096～7.2 USP/mL范圍內(nèi)與△I470nm之間呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。檢測(cè)限分別為0.00832、0.04068、0.0814 U

3、SP/mL。TCA共振散射光譜法(RSS)應(yīng)用于嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力測(cè)定，結(jié)果滿意。 第三部分：四種動(dòng)物蛋白酶活力的催化共振散射光譜測(cè)定在所選實(shí)驗(yàn)條件下，糜蛋白酶、胰蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶均能催化水解酪蛋白生成小分子產(chǎn)物。加入三氯乙酸可與剩余的酪蛋白結(jié)合形成締合微粒并中止酶催化反應(yīng)。該微粒在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm處產(chǎn)生5個(gè)共振散射峰，其中最強(qiáng)峰位于470 nm處。糜蛋白酶、胰

4、蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶的酶活力分別在0.0012～0.06 U/mL、0.00024-0.04 U/mL、0.0002～0.006 U/mL、0.0006-0.024 U/mL范圍內(nèi)與470 nm處的散射光強(qiáng)度降低值△I470nm之間呈良好線性關(guān)系，其檢出限分別為0.001148 U/mL 、0.000839 U/mL 、0.000156 U/mL、 0.000557 U/mL。該法應(yīng)用于實(shí)際樣品中糜蛋白酶活力測(cè)定，結(jié)果比較滿意。

5、 第四部分：溶壁微球菌的共振散射光譜研究及其在溶菌酶活力測(cè)定中的應(yīng)用溶壁微球菌在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm 和520 nm處產(chǎn)生5個(gè)共振散射峰，菌濃度在2.0×106～9.3×108個(gè)/mL范圍內(nèi)與共振散射光強(qiáng)度I470nm有良好的線性關(guān)系。基于溶菌酶對(duì)溶壁微球菌的催化水解作用導(dǎo)致體系I470nm降低，建立了一個(gè)檢測(cè)0.24～40 U/mL(即0.012～2 μg/mL)溶菌酶的共振散射光譜新方法，其

6、檢出限（3σ）為0.014 U/mL(即0.0007 μg/mL)。該法測(cè)定唾液樣品的分析結(jié)果與比濁法結(jié)果一致，兩種方法結(jié)果的線性回歸方程的斜率、相關(guān)系數(shù)和截距分別為0.9665、0.9973和-87.50。 第五部分：辣根過(guò)氧化物酶活力的催化共振散射光譜測(cè)定在所選實(shí)驗(yàn)條件下，辣根過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化KI生成I2，過(guò)量的I-與I2可結(jié)合形成I3-,而I3-分別與羅丹明S（RhS）, 羅丹明G（Rh6G）,羅丹明B（RhB）

7、, 丁基羅丹明B（b-RhB）結(jié)合形成(Rh+ -I3-)締合微粒，在320 nm、424 nm、508 nm、和610 nm處產(chǎn)生較強(qiáng)的共振散射效應(yīng)。但四體系在610 nm處的共振散射均分別受RhS 556 nm、Rh6G 556 nm、RhB 580 nm、b-RhB 580 nm處同步熒光峰的影響。對(duì)于RhS、Rh6G、RhB、b-RhB四體系，辣根過(guò)氧化物酶的濃度分別在3.2×10-12g～4.8 ×10-9g /mL、2×10