低溫脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵工藝研究.pdf

1、新疆地處我國大西北，存在著很多的低溫環(huán)境(冰川和高山)，為尋找低溫微生物供了理想的采樣區(qū)域。低溫微生物所產(chǎn)的酶大多是低溫酶。低溫酶能在低溫下有效發(fā)揮催化作用的特點(diǎn)，使其在生物工程領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。因此，對(duì)低溫微生物的研究無論在理論上還是實(shí)踐上都有重要意義。
　　 本研究從來自新疆伊犁和阿勒泰地區(qū)的75份土樣中分離出產(chǎn)低溫脂肪酶的低溫菌6株，經(jīng)初篩和搖瓶復(fù)篩確定一株產(chǎn)低溫脂肪酶活力較高的菌株N6-12作為進(jìn)一步研究的出發(fā)菌株

2、。菌株N6-12在完全培養(yǎng)基上20℃培養(yǎng)72 h后，菌落白色、圓形、隆起、不透明、表面光滑、濕潤、邊緣波狀。菌體革蘭氏陰性、桿狀、能運(yùn)動(dòng)。常規(guī)生理生化測(cè)試表明，菌株N6-12兼性厭氧，最適生長溫度25℃，40℃以上不生長，氧化酶反應(yīng)陽性，接觸酶反應(yīng)陽性，不產(chǎn)H2S，明膠液化剛性，水解淀粉陰性，反硝化作用陽性，脂酶陽性，能利用葡萄糖、果糖。經(jīng)過16SrDNA鑒定，與假單胞菌有97.6％的相似度。結(jié)合形態(tài)學(xué)、生理生化特征和16SrDNA序列

3、分析結(jié)果，初步認(rèn)定菌株N6-12屬于假單胞菌屬，暫命名為Pseudomonas sp.N6-12。
　　 對(duì)菌株N6-12產(chǎn)的脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明該低溫脂肪酶的最適催化溫度為30℃，30℃下處理120min，酶活性仍有70％。該酶催化的最適pH6.5，在不同pH下的穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示，該酶在pH5.5～8內(nèi)均較穩(wěn)定。金屬離子中，Cu2+、Fe3+對(duì)酶有較大的抑制作用，Na+則對(duì)酶有激活作用。在搖瓶發(fā)酵水平上，對(duì)假

4、單胞菌N6-12的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行了研究，確定了其最佳培養(yǎng)基成分及最佳培養(yǎng)條件。研究了不同碳源、氮源、無機(jī)鹽、產(chǎn)物、底物等因素對(duì)假單胞菌N6-12產(chǎn)酶的影響，發(fā)現(xiàn)玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量對(duì)產(chǎn)酶的影響較大。對(duì)玉米漿、豆粕粉、葡萄糖、裝填量四因素各選取三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，確定假單胞菌N6-12產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)基成分為玉米漿2％，豆粕粉3％、葡萄糖1％，裝填量為50ml/250ml。通過搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)，確定其最佳培養(yǎng)條件為：25℃，180