BSG基因功能性SNP與銀屑病易感性的關(guān)聯(lián)分析及生物學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、[研究背景]
　　銀屑病(PS;MIM＃177900)是一類以紅斑、鱗屑為主要表現(xiàn)的慢性、炎癥性、免疫介導(dǎo)的皮膚疾病。目前認為,銀屑病是由遺傳、免疫及環(huán)境等因素共同引起的多因素、復(fù)雜疾病,皮損的基因表達譜分析發(fā)現(xiàn)有超過1300個基因的表達水平發(fā)生了改變;利用家系譜系分析,共發(fā)現(xiàn)了至少9個銀屑病易感基因位點,但其確切的發(fā)病機制還有待明確。BSG(MIM109480),又稱CD147,是一類免疫球蛋白超家族成員的跨膜糖蛋白,在胸腺T細

2、胞發(fā)育、外周T細胞活化等免疫途徑中發(fā)揮重要作用。BSG基因位于人類染色體19p13,這個區(qū)域通過全基因組掃描及非參數(shù)連鎖分析鑒定為銀屑病易感位點6(PSOR6)。重要的是,在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn),在銀屑病皮損及原代T細胞中,CDl47的表達水平明顯增高。基于以上背景,本研究選擇編碼CD147蛋白分子的BSG基因作為銀屑病基因多態(tài)性研究的一個候選基因,從遺傳學(xué)層面來驗證BSG基因與銀屑病易感性的相關(guān)性,并進一步驗證.BSG基因功能性SNP

3、位點在銀屑病發(fā)病機制中發(fā)揮的生物學(xué)效應(yīng)。
　　[研究方法和結(jié)果]
　　1.運用real-time PCR及Western blotting的方法,我們證實銀屑病患者的PBMCs中BSG的mRNA和蛋白表達水平均較正常人明顯增高(p=0.005and p=0.042)。
　　2.運用病例-對照的方法,隨機選取散發(fā)性尋常型銀屑病患者668例和正常對照1,143例,采用PCR-RFLP的方法,研究了位于BSG基因3'UTR區(qū)

4、的多態(tài)性位點rs8259:T＞A與銀屑病易感性的關(guān)聯(lián)。在基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡的基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)rs8259 T等位基因(TT+AT基因型)在銀屑病病例較對照組的頻率顯著降低(63.0％vs68.2％,p=0.0009),進一步根據(jù)年齡、性別、吸煙及飲酒史和家族史等銀屑病危險因素校正后,證實rs8259多態(tài)位點的T等位基因(OR=0.758,95％CI=0.638～0.901;p=0.002)能減低罹患銀屑病的風(fēng)

5、險。
　　3.基于生物信息學(xué)在線軟件預(yù)測及數(shù)據(jù)庫比對的方法,發(fā)現(xiàn)BSG基因3'UTR區(qū)的多態(tài)性位點rs8259:T＞A位于miR-492結(jié)合的“種子”序列上,推測rs8259位點的可變等位基因,可能通過影響miR-492與BSGmRNA的結(jié)合能力而改變基因表達水平。
　　4.運用real-time PCR,檢測銀屑病患者和正常人PBMCs中miR-492均有表達,其兩組間表達量并無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.557);構(gòu)建包含多態(tài)位

6、點rs8259不同等位基因片段的熒光素酶報告基因載體,通過熒光素報告基因分析方法,觀察rs8259多態(tài)位點的不同等位基因是否能影響B(tài)SG表達,在外源給予不同濃度‘mimic miRNA-492’(1.0nM;2.5nM;5.0nM;and10nM)序列和包含rs8259多態(tài)位點的熒光素酶報告基因載體共同轉(zhuǎn)染HEKK293T細胞的實驗中,證實BSG基因rs8259多態(tài)位點存在的T等位基因,可以影響miRNA-492與之結(jié)合的能力,并呈劑量

7、依賴性的抑制了熒光素酶報告基因的活性,而攜帶A等位基因的載體不表現(xiàn)出抑制熒光素酶活性的能力。
　　5.進一步驗證功能性SNP位點rs8259:T＞A對BSG表達的影響。分別檢測了攜帶rs8259 T、A等位基因的銀屑病純合子患者PBMCs中BSG表達情況,證實TT基因型銀屑病患者PBMCs中BSG的蛋白表達水平明顯低于AA基因型銀屑病患者(p=0.027),但其BSG mRNA的表達水平在兩組之間并無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.237)。