β-TrCP基因多態(tài)與肝細(xì)胞肝癌易感性關(guān)聯(lián)研究及功能分析.pdf

1、目的:篩選出β-TrCP基因3'UTR區(qū)域內(nèi)與肝細(xì)胞肝癌易感性關(guān)聯(lián)的基因多態(tài)位點(diǎn),并初步探討功能性多態(tài)位點(diǎn)參與調(diào)節(jié)β-TrCP基因表達(dá)的分子機(jī)理。
　　 方法:(1)運(yùn)用生物信息學(xué)方法篩選β-TrCP基因3’UTR區(qū)域內(nèi)多態(tài)位點(diǎn),篩選條件:位于人類(lèi)已知miRNA結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)且最低等位基因頻率大于0.3；(2)通過(guò)病例對(duì)照研究檢測(cè)篩選出的位點(diǎn)與肝細(xì)胞肝癌易感性是否存在關(guān)聯(lián)；(3)對(duì)存在顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn),運(yùn)用Real-time PCR法進(jìn)

2、一步觀察該位點(diǎn)基因型與肝細(xì)胞肝癌組織中β-TrCP基因mRNA表達(dá)水平是否相關(guān)；(4)對(duì)功能性多態(tài)位點(diǎn),聯(lián)合運(yùn)用MiRanda和TargetScan等生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)并分析其影響miRNA與靶基因結(jié)合的分子機(jī)理。
　　 結(jié)果:
　　 (1)生物信息學(xué)方法篩選出rs16405位點(diǎn)位于已知miRNA結(jié)合靶點(diǎn)內(nèi)且具有較好的基因分布頻率,基因分型結(jié)果顯示病例組中rs16405位點(diǎn)插入(INS)和缺失(DEL)等位基因頻率分別為

3、0.379和0.621；正常組為0.305和0.695；
　　 (2)校正年齡、性別、吸煙、飲酒及HBV感染因素后,Logistic回歸分析結(jié)果顯示rs16405位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組中等位基因頻率分布存在顯著差異(P<0.05),與INS等位基因相比,攜帶有DEL等位基因的個(gè)體患HCC風(fēng)險(xiǎn)明顯降低(OR=0.72,95％CI:0.56-0.92),進(jìn)一步按基因型統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示與INS／DEL基因型和INS／INS基因型相比,

4、基因型為DEL／DEL的個(gè)體患HCC風(fēng)險(xiǎn)率明顯降低；
　　 (3)Real-time PCR結(jié)果證實(shí)rs16405不同基因型與β-TrCP mRNA表達(dá)水平存在顯著關(guān)聯(lián)性(P<0.05),rs16405位點(diǎn)INS／INS純合子組肝癌組織的β-TrCP表達(dá)水平最高,分別是INS／DEL組的3.99倍,DEI／DEL組的7.04倍；
　　 (4)通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè),我們發(fā)現(xiàn)rs16405位點(diǎn)的INS等位基因能破壞miR-92

5、0與β-TrCP基因3’UTR結(jié)合,從而可能抑制了miR-920對(duì)β-TrCP基因的降解作用,提高了β-TrCP mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)論:(1)通過(guò)病例對(duì)照研究,成功篩選出β-TrCP基因rs16405位點(diǎn)與肝癌易感性存在顯著關(guān)聯(lián)；(2)通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了rs16405位點(diǎn)與β-TrCP mRNA水平顯著相關(guān)；(3)運(yùn)用生物信息學(xué)工具,我們提出了一個(gè)rs16405調(diào)節(jié)β-TrCP表達(dá)的模型,即它可能通過(guò)影響miR-920