山莨菪堿和新斯的明聯(lián)合治療小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用研究.pdf

1、研究目的:
　　 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種多關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，有關(guān)節(jié)外組織器官受累，可致殘。傳統(tǒng)的治療RA的方法，主要是采用非甾體類抗炎藥物、糖皮質(zhì)激素以及能夠改善病情的抗風(fēng)濕類藥物。RA患者的關(guān)節(jié)滑膜液和血液中有多種細(xì)胞因子存在，而致炎細(xì)胞因子在RA滑膜成纖維細(xì)胞侵襲性生長方面充當(dāng)了至關(guān)重要的角色。
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)主要通過迷走神經(jīng)反射參與炎

2、癥調(diào)控，在限制炎癥應(yīng)答的過程中發(fā)揮著重要的角色，被稱作“膽堿能抗炎通路”。迷走神經(jīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，是膽堿能抗炎通路的關(guān)鍵性介質(zhì)。神經(jīng)遞質(zhì)主要與尼古丁乙酰膽堿受體(nAChR)家族作用，尤其是巨噬細(xì)胞上的α7亞型(α7nAChR)。山莨菪堿通過阻斷M膽堿受體，使體內(nèi)更多的乙酰膽堿作用于巨噬細(xì)胞α7尼古丁受體，加強(qiáng)了乙酰膽堿對(duì)巨噬細(xì)胞α7尼古丁受體的激活作用，從而激活了膽堿能抗炎通路，達(dá)到治療RA的作用。
　　 鑒于臨床上單

3、獨(dú)使用山莨菪堿存在用藥劑量大，容易產(chǎn)生阿托品樣副作用的缺點(diǎn)，而且臨床上單獨(dú)使用膽堿脂酶抑制劑治療容易引起乙酰膽堿蓄積導(dǎo)致心血管系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的副作用。在此，我們首次提出將毒蕈堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑這兩類藥物以適當(dāng)?shù)谋壤?lián)合使用（即復(fù)方山莨菪堿）的治療方案來協(xié)同激活膽堿能抗炎通路，增強(qiáng)其抗炎效果并降低其副作用。為臨床治療RA提供新的治療策略。而且，我們課題組之前的研究工作表明復(fù)方山莨菪堿即山莨菪堿和新斯的明聯(lián)合治療可以激活α7nAC

4、hR，已申請(qǐng)專利。因此，本課題對(duì)此復(fù)方治療RA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性研究和探索。
　　 研究方法:
　　 以膠原蛋白誘導(dǎo)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型在RA的研究過程中是較常見的，所以本研究首先以膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎DBA/1J小鼠為模型。利用整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法研究山莨菪堿(25mg/kg，i.p)及新斯的明(50μg/kg，i.p)復(fù)方對(duì)小鼠關(guān)節(jié)炎的治療作用，使用關(guān)節(jié)炎指數(shù)及足趾腫脹程度評(píng)估關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度，影像學(xué)及組織學(xué)評(píng)分判斷復(fù)方對(duì)其治療的

5、影響。并采用ELISA方法檢測復(fù)方對(duì)血清炎癥細(xì)胞因子(TNFα，IL-6，IL-1β)的表達(dá)，及Ⅱ型膠原蛋白特異性抗體(IgG, IgG1，IgG2a)的表達(dá)影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.用膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型(CIA)，用復(fù)方治療組小鼠關(guān)節(jié)炎程度明顯減輕。關(guān)節(jié)炎評(píng)分治療組小鼠明顯低于對(duì)照組，通過治療，治療組小鼠的體重也高于對(duì)照組;
　　 2.影像學(xué)X光的結(jié)果表明治療組與對(duì)照組相比骨質(zhì)流失明顯減少。Micr

6、o-CT的結(jié)果則表明用復(fù)方治療后關(guān)節(jié)炎小鼠的骨侵蝕明顯輕于對(duì)照組;
　　 3.組織學(xué)切片HE染色的結(jié)果顯示治療組小鼠的關(guān)節(jié)形態(tài)比較完整并且滑膜侵蝕程度也明顯輕于對(duì)照組;
　　 4.血清中炎癥因子的ELISA結(jié)果顯示，用復(fù)方治療后，血清中炎癥因子(TNFα，IL-6，IL-1β)明顯減少;
　　 5.血清中類風(fēng)濕病的特定指標(biāo)Ⅱ型膠原蛋白特異性抗體(IgG, IgG2a)在復(fù)方治療后，治療組比對(duì)照組明顯較少。