切除眼柄對(duì)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)差異表達(dá)基因的影響及幾種重要基因在不同卵黃發(fā)生階段的表達(dá)量變化.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)是我國(guó)主要養(yǎng)殖蝦類之一。本實(shí)驗(yàn)利用抑制性消減雜交技術(shù)（SSH）構(gòu)建了卵巢和肝胰腺在卵原細(xì)胞增殖期（第一期，切除眼柄前）與初級(jí)卵黃發(fā)生期（第三期，切除眼柄后）差異表達(dá)基因的文庫(kù)。通過(guò)單克隆進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與GenBank進(jìn)行BLASTx與nucleotide BLAST進(jìn)行同源性分析，利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行差異表達(dá)基因功能的注釋，選取部分有代表性的差異表達(dá)基因進(jìn)行熒光定量PCR，研究

2、差異表達(dá)基因在卵巢和肝胰腺各個(gè)發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況。分析這些差異表達(dá)的基因與卵黃發(fā)生之間的關(guān)系。并且通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)，專門(mén)研究了在不同卵黃發(fā)生階段，主要差異表達(dá)基因以及卵黃蛋白原和血藍(lán)蛋白在卵巢與肝胰腺中表達(dá)量變化，并分析它們與卵黃發(fā)生作用的關(guān)系。
　　研究結(jié)果表明，卵巢第一期差異表達(dá)基因?yàn)椋簶O孔樣蛋白、肌動(dòng)蛋白、血小板反應(yīng)蛋、及核自身抗原精子蛋白基因。卵巢第三期差異表達(dá)基因分別是；脂肪酸結(jié)合蛋白、二硫鍵異構(gòu)酶、轉(zhuǎn)醛醇酶、及血

3、藍(lán)蛋白基因。肝胰腺第一期差異表達(dá)基因是：ATP亞基、NADH亞基和鐵蛋白基因。第三期差異表達(dá)基因有兩個(gè)，分別是血藍(lán)蛋白和卵黃蛋白原基因。
　　極孔樣蛋白和卵黃蛋白基因在卵巢第一期和第三期均有表達(dá)，前者在第一期表達(dá)強(qiáng)烈，后者則在第三期有旺盛表達(dá)?；虮磉_(dá)狀況與第一期卵母細(xì)胞分裂和第三期卵黃合成的生理活動(dòng)密切相關(guān)。
　　熒光定量 PCR結(jié)果表明，極孔樣蛋白（PH）、核自身抗精原蛋白(NA)、和血小板蛋白(THP)基因主要在卵巢表

4、達(dá)。而且在切除眼柄前，這些基因的表達(dá)量都最高，隨著卵巢發(fā)育，其表達(dá)量逐步下降，在第四-五期達(dá)到最低，其后稍有增加。PH、NA等基因的主要功能是信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)控細(xì)胞分裂，因此卵巢發(fā)育前期，他們的表達(dá)相對(duì)較高，與卵巢發(fā)育的生理活動(dòng)是緊密關(guān)聯(lián)的。
　　利用熒光定量 PCR技術(shù)分別檢測(cè)了血藍(lán)蛋白與卵黃蛋白原 mRNA在卵巢和肝胰腺不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量。結(jié)果顯示，血藍(lán)蛋白 mRNA主要在肝胰腺中表達(dá)，隨著卵巢的發(fā)育，表達(dá)量呈增加趨勢(shì)，至第三期