水黃皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其提取物安全性評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的：從水黃皮的生藥學(xué)和含量測(cè)定研究入手,建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：篩選水黃皮根總黃酮提取與純化方法,并對(duì)其提取物(水黃皮根總黃酮)進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)研究。
　　 方法：(1)采用性狀鑒定、顯微、理化、薄層鑒別(TLC)以及紫外吸收光譜(UV)等方法對(duì)水黃皮進(jìn)行系統(tǒng)的生藥學(xué)研究；(2)采用UV和高效液相色譜法(HPLC)分別測(cè)定水黃皮藥材中總黃酮和水黃皮素的含量；(3)采用單因素試驗(yàn)與正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選水黃皮根總黃酮最佳提取工藝條件,并采用大孔

2、吸附樹(shù)脂對(duì)其提取物進(jìn)行純化；(4)采用Bliss法PRF進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)研究:昆明小鼠一天內(nèi)經(jīng)口單次給予PRF,連續(xù)觀察14天,觀察PRF對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)、體重變化及動(dòng)物死亡情況,并計(jì)算LD50及其95％可信限；(5)觀察不同劑量的PRF對(duì)SD大鼠連續(xù)灌胃90d,恢復(fù)期觀察14天,期間測(cè)量大鼠體重、攝食量、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo),計(jì)算臟器系數(shù),并進(jìn)行病理學(xué)檢查。
　　 結(jié)果：(1)提出了水黃皮藥材性狀和顯微鑒別特征；理化

3、鑒別顯示水黃皮含有黃酮類(lèi)和三萜類(lèi)化合物；薄層鑒別顯示水黃皮藥材含有水黃皮素；紫外.可見(jiàn)光譜掃描顯示水黃皮藥材水提液在200 nm～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)吸收,60％乙醇提取液在260和303nm處有最大吸收,氯仿提取液在244和322nm處有最大吸收；(2)UV法測(cè)得水黃皮根中總黃酮含量為1.05％；HPLC法測(cè)的水黃皮根中水黃皮素含量分別為0.164％；(3)水黃皮根總黃酮最佳提取工藝為:每g藥材粗粉加入20倍量60％乙醇,于80℃回

4、流提取3次,每次1.0 h。大孔吸附樹(shù)脂純化PRF結(jié)果為:D101最適于水黃皮總黃酮的純化,最佳工藝為:調(diào)節(jié)水黃皮根提取液總黃酮濃度約為0.6mg.mL-1,調(diào)pH=3,以2mL·min-1的流速上樣,以相同速率用適量純化水洗脫(molish反應(yīng)陰性)后,再用3BV20％乙醇溶液除雜洗脫,最后用70％乙醇作為洗脫劑進(jìn)行洗脫,純化后總黃酮含量可達(dá)50％以上；(4)按Bliss法求得PRF小鼠灌胃的LD50為3.3016 g/kg,其95％

5、的可信限為2.8895 g/kg～3.7953 g/kg。對(duì)死亡小鼠立即進(jìn)行解剖,肉眼觀察主要臟器均未見(jiàn)出血等異?，F(xiàn)象。對(duì)各組存活小鼠逐日觀察2周,其外觀特征、毛色、行為活動(dòng)、飲食、精神狀態(tài)、糞便性狀等在給藥次日恢復(fù)正常,試驗(yàn)結(jié)束時(shí),小鼠體重明顯增長(zhǎng)。(5)長(zhǎng)毒研究表明,PRF對(duì)大鼠體重和攝食量無(wú)明顯影響,大鼠臟器系數(shù)、血液學(xué)指標(biāo)有部分變化,但在恢復(fù)期結(jié)束后基本恢復(fù)正常。肝臟、腎臟、心臟、子宮和前列腺等可見(jiàn)充血和炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。<

6、br>　　 結(jié)論：(1)建立了水黃皮藥材的顯微、TLC和紫外光譜掃描等鑒別方法。(2)建立了UV法測(cè)定水黃皮根中總黃酮和HPLC法測(cè)定水黃皮根中水黃皮素含量的方法,兩種方法穩(wěn)定性和重復(fù)性較好,可用于水黃皮藥材的質(zhì)量控制。(3)優(yōu)選出了水黃皮根總黃酮提取純化工藝,經(jīng)純化后總黃酮含量大于50％,可達(dá)到純化的目的。(4)PRF小鼠急性毒性試驗(yàn)LD50為3.3016g/l(g,主要臟器未見(jiàn)明顯病變,亦未見(jiàn)遲發(fā)型毒性反應(yīng)。(5)PRF大鼠3個(gè)月