ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術的建立及其臨床應用研究.pdf

1、中國協和醫(yī)科大學碩士學位論文ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術的建立及其臨床應用研究姓名：傅軍申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：張偉2003.5.1中國協和醫(yī)科大學碩士學位論文ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術的建立及其臨床應用研究中文摘要目的：建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術，并探討其對腫瘤臨床治療的指導意義。方法：采用基因克隆、基因定點突變、發(fā)酵和層析技術，生產具有較高熱穩(wěn)定性和發(fā)光效率的重組熒光酶作為該檢測技術的核

2、心酶試劑：通過細胞培養(yǎng)技術篩選出具有使腫瘤細胞在體外選擇性生長功能的培養(yǎng)基；以自產試劑為核心試劑建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術，以卵巢癌為研究模型進行卵巢癌體外藥敏檢測，研究該體外藥敏檢測方法與臨床療效的相關性。結果：突變熒光酶M245在熱穩(wěn)定性和發(fā)光效率方面優(yōu)于野生型熒光酶，其在檢測敏感性、特異性、線性關系方面與國外試劑盒用酶相同：腫瘤細胞選擇性培養(yǎng)基在所需培養(yǎng)時間內能促進腫瘤細胞的生長，同時還能抑制正常細胞生長，促進其死亡，

3、體現了較好的選擇性；建立該技術核心試劑的質量控制標準；ATPTCA檢測技術與常規(guī)MTT法相比，具有相關性好(r=O9981)，量程跨越4個數量級(10—80000個細胞)，檢測敏感程度高(最小檢測lO個細胞)的優(yōu)點；34例卵巢癌體外藥敏檢測表明，ATPTCA法可反映不同病人對各抗腫瘤藥物的敏感性的個體差別，其結果與臨床療效及相關臨床資料有較好的吻合性：整體預測值906％，陽性預測值947％，陰性預測值846％，敏感性90％，特異性917

4、％。結。論：ATP生物熒光體外腫瘤藥敏檢測技術是一種較好的體外藥敏檢測方法，標本可評價率高，檢測結果與臨床療效及相關臨床資料有較好的吻合性。該藥敏檢測方法對抗腫瘤藥物篩選和應用、臨床藥物新適應癥研究、化療方案篩選和評估以及推廣個體化治療具有實際指導意義。以自產熒光酶及選擇性培養(yǎng)基為核心試劑建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術填補了國內在該領域的空白，并申請發(fā)明專利一項(已獲受理)。關鍵詞：ATP生物熒光技術，體外藥敏檢測，基因克隆，突