細(xì)胞外ATP經(jīng)P2嘌呤受體誘導(dǎo)細(xì)胞周期進(jìn)展與肝臟增殖的研究.pdf

1、近年來，細(xì)胞外ATP已成為重要的信息分子，在細(xì)胞應(yīng)激條件下，ATP可從細(xì)胞內(nèi)分泌釋放出來，它通過激活細(xì)胞表面受體對多種組織和器官的多種功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，也包括對再生的調(diào)節(jié)作用。盡管人們已經(jīng)知道細(xì)胞外ATP可對肝臟的許多功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，但它在肝細(xì)胞增殖和再生中所起的作用迄今尚不清楚。本課題研究的目的是探討細(xì)胞表面的嘌呤信號是否能通過激活JNK來促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖及肝臟的再生，及P2嘌呤受體所介導(dǎo)的Ca2+和蛋白激酶C(PKC)信號系統(tǒng)在JNK信號

2、的誘導(dǎo)方面的作用。　　實驗結(jié)果表明，應(yīng)用ATPγS(非水解性ATP的類似物)處理原代肝細(xì)胞時再現(xiàn)了與肝臟再生有關(guān)的一系列早期信號，如快速而短暫的JNK信號系統(tǒng)的激活，立即早期基因(immediateearlygenes)-c-jun和c-fos的mRNA的表達(dá)增高及活化蛋白-1(AP-1)DNA結(jié)合活性的增強(qiáng)等。激活劑選擇性試驗的結(jié)果顯示UTP＞ATP＞ATPγS。這表明細(xì)胞外ATP是通過激活P2Y2受體而起作用。體外試驗結(jié)果也表明，

3、當(dāng)ATPγS單獨(dú)作用或與表皮生長因子(EGF)協(xié)同作用可促進(jìn)與細(xì)胞周期進(jìn)展有關(guān)的關(guān)鍵性細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)如細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的蛋白表達(dá)和肝細(xì)胞的增殖。特別需要指出的是，10nM的ATP就足以增強(qiáng)EGF誘導(dǎo)的細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。Phospho-JNK，Phospho-c-jun，細(xì)胞周期蛋白D1及PCNA的免疫印跡結(jié)果顯示，部分肝臟切除可快速而強(qiáng)烈的誘導(dǎo)JNK信號系統(tǒng)的活化，并增強(qiáng)對未切除肝臟

4、對增殖的反應(yīng)。Ki67及PCNA的免疫組化分析也證實了這一結(jié)果。體內(nèi)試驗顯示通過門靜脈輸注ATP可直接激活肝臟的JNK信號，而輸注P2嘌呤受體的拮抗劑－PPADS，并對Sprague-Dawley大鼠施行部分肝臟切除，可抑制JNK的活化以及肝臟的再生。此外，為了探討蛋白激酶C是否是潛在的上游介導(dǎo)物并激活肝細(xì)胞的JNK信號，我們還應(yīng)用了小分子PKC的抑制劑Go6976，Go6983及Go6850，它們特異性的抑制不同的PKC亞型。結(jié)果顯示

5、，細(xì)胞外ATP可快速誘導(dǎo)多種Ca-依賴、Ca-不依賴及非典型性蛋白激酶C亞型的活化及其亞型由胞質(zhì)向胞膜的轉(zhuǎn)位。我們的免疫組化染色顯示，一種非典型性的PKC亞型-PKCμ可在ATPγS作用下，10分鐘內(nèi)由胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞核內(nèi)。試驗結(jié)果還顯示，ATPγS誘導(dǎo)的JNK活化并不依賴于Ca2+信號和PLC?！　〗Y(jié)論：在體外，細(xì)胞外ATP作為肝臟的有絲分裂原可激活JNK信號及肝細(xì)胞的增殖。在體內(nèi)，細(xì)胞外ATP也可促發(fā)再生肝臟中的JNK信號。細(xì)胞外AT