黃瓜果瘤基因Tu的遺傳轉(zhuǎn)化研究及黃瓜無側(cè)枝基因nlb的初步定位.pdf

1、本實驗室通過前面的研究，利用圖位克隆的方法克隆得到控制黃瓜果瘤性狀的基因Tu，且發(fā)現(xiàn)Tu基因的完全缺失導(dǎo)致無果瘤性狀的發(fā)生。生物信息學(xué)軟件預(yù)測該基因編碼鋅指蛋白(zinc finger protein)轉(zhuǎn)錄因子，為了進(jìn)一步驗證 Tu基因的生物學(xué)功能，探究該轉(zhuǎn)錄因子在黃瓜轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要作用，故對其進(jìn)行黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化研究。
　　以黃瓜無果瘤品系S06苗齡子葉節(jié)為外植體，構(gòu)建含有黃瓜自身啟動子的黃瓜果瘤基因Tu表達(dá)載體pCAMBIA23

2、01-Tu，將表達(dá)載體通過點擊法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌菌株GV3101中，進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜果瘤基因Tu的遺傳轉(zhuǎn)化研究。
　　通過優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化的生根條件以及抑制農(nóng)桿菌生長條件等，將生根培養(yǎng)中卡那霉素(Kan)濃度調(diào)至30mg/L，抑制農(nóng)桿菌生長抗生素為特美汀(Ti)150mg/L+頭孢霉素(Cef)100mg/L時，一定程度上提高了遺傳轉(zhuǎn)化的效率。580個外植體通過抗生素篩選獲得的18株再生苗，通過PCR檢測和測序鑒定，最終獲得8株轉(zhuǎn)化

3、苗，轉(zhuǎn)化效率為1.37％。
　　以黃瓜(Cucumis sativus L.)無側(cè)枝品系419(P1)和長側(cè)枝品系SB-2(P2)為親本，構(gòu)建136株F2群體為試驗材料，對黃瓜無側(cè)枝基因nlb進(jìn)行基因定位研究。田間調(diào)查和遺傳分析發(fā)現(xiàn)F2群體的表現(xiàn)型為長側(cè)枝與無側(cè)枝，χ2(χ2=0.04＜3.84)檢驗表明其分離比為3∶1。運用分離群體分組混合分析法(bulked segregant analysis，BSA),從F2中無側(cè)枝群體和