小鼠體內(nèi)外胚胎MET時(shí)期抗氧化酶表達(dá)的研究.pdf

1、有研究表明，小鼠早期胚胎母型向合子型過渡時(shí)期極易發(fā)生2-細(xì)胞阻滯現(xiàn)象，而外界環(huán)境中的各種因素能夠造成胚胎內(nèi)ROS含量升高，抗氧化酶是清除細(xì)胞內(nèi)ROS的主要酶類。隨著研究進(jìn)展，MET時(shí)期可分為1-cell期(hCG后27h)、2-cell中期(hCG后42h)、2-cell后期(hCG后51h)、4-cell期(hCG后66h)，但是對(duì)于2-細(xì)胞而言，哪個(gè)時(shí)期最易發(fā)生阻滯仍不清楚，并且克服細(xì)胞阻滯現(xiàn)象的主要抗氧化酶與ROS之間的變化關(guān)系尚

2、不明確。因此本試驗(yàn)通過DCFH-DA染色法，確定各時(shí)期ROS含量，采用PCR擴(kuò)增和蛋白免疫印跡方法，了解抗氧化酶與ROS之間的變化關(guān)系。通過試驗(yàn)得到如下結(jié)果:
　　1.DCFH-DA染色結(jié)果顯示，小鼠胚胎MET階段各時(shí)期中，2-細(xì)胞后期ROS含量最高，顯著高于1-cell1期、2-cell中期、4-cell期。各時(shí)期體外胚胎內(nèi)的ROS含量均高于體內(nèi)組。
　　2.不同的抗氧化酶基因mRNA的表達(dá)量在1-cell到4-cell發(fā)

3、育階段均有所不同，GPX1基因在2-cell后期表達(dá)量最高，顯著高于1-cell、2-cell中期、4-cell時(shí)期， SOD1、SOD2、SOD3、CAT、GPX2基因在4-cell期表達(dá)量最高，顯著高于1-cell、2-cell中期、2-cell后期。
　　3.CAT、GPX1和SOD1 mRNA的表達(dá)量MET時(shí)期各細(xì)胞階段體外組的表達(dá)量顯著高于體內(nèi)組，SOD2和SOD3 mRNA的表達(dá)量在MET時(shí)期個(gè)細(xì)胞階段均呈上升趨勢，S

4、OD2在1-cell期和2-cell中期體內(nèi)外表達(dá)量沒有顯著性差異，SOD3在2-cell后期和4-cell期體內(nèi)外表達(dá)量沒有顯著性差異，GPX2 mRNA的表達(dá)量在MET階段各時(shí)期體內(nèi)組和體外組之間沒有顯著性差異。
　　4.蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，小鼠胚胎MET階段各時(shí)期中體內(nèi)外CAT和SOD1蛋白表達(dá)量在4-cell期最高，體內(nèi)外GPX1蛋白均在2-細(xì)胞后期時(shí)表達(dá)量最高。SOD1和GPX1蛋白表達(dá)量體外組均高于體內(nèi)組，但CAT基