Toll樣受體9信號(hào)通路在肝臟缺血再灌注后肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、很多實(shí)驗(yàn)報(bào)道缺血再灌注能夠促進(jìn)結(jié)腸癌和肝癌的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)。缺血再灌注會(huì)導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子和粘附分子的生成，這些因子在腫瘤的粘附和轉(zhuǎn)移中起重要作用。TLR9是toll樣受體中的一種。阻斷TLR9能夠緩解缺血再灌注損傷。那么，阻斷TLR9信號(hào)通路是否能夠通過(guò)緩解缺血再灌注，從而抑制缺血再灌注后腫瘤的轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)。
　　目的：探討TLR9這個(gè)炎癥相關(guān)的受體及其信號(hào)通路在缺血再灌注損傷后肝癌轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)中的作用及機(jī)制。
　　材料和方法：

2、
　　1、建立70％缺血再灌注模型和建立肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移模型。分為四組：第1組：假手術(shù)組；第2組：缺血15min組；第3組：缺血30min組；第4組：缺血45min組。四組都要在再灌注后注射腫瘤細(xì)胞。觀察小鼠的生存時(shí)間，腫瘤大體觀察，腫瘤組織切片HE染色計(jì)算腫瘤肝組織被替代區(qū)域（hepaticreplacementarea,HRA）。
　　2、將動(dòng)物分為四組：A組:ControlODN+sham;B組:iCpG+sham;C組:

3、ControlODN+I/R;D組;iCpG+I/R；然后注射腫瘤細(xì)胞。觀察小鼠的生存時(shí)間，取14天腫瘤大體標(biāo)本觀察，腫瘤組織切片HE染色計(jì)算腫瘤的肝組織被替代區(qū)域（HRA）。術(shù)后2h處死，行PCR檢測(cè)E-selectin、ICAM-1、HIF-1α、ROCK-2的mRNA水平，用EMSA法檢測(cè)NF-κB的活性，血清用生化法檢測(cè)ALT。取術(shù)后24h標(biāo)本，檢測(cè)蛋白TLR9，MyD88，E-selectin和ICAM-1的表達(dá)，取血清用EL

4、ISA法檢測(cè)sICAM-1、TNF-α。
　　結(jié)果：
　　1.缺血再灌注30min、45min組較假手術(shù)組肝臟腫瘤HRA增加，小鼠的生存時(shí)間縮短，同時(shí)ALT升高。
　　2.缺血再灌注增加腫瘤的HRA，縮短荷瘤小鼠生存時(shí)間，而iCpG能夠減緩腫瘤的HRA，延長(zhǎng)其生存時(shí)間。iCpG能夠抑制I/R后的ALT的水平。
　　3.缺血再灌注能夠促使E-selectinmRNA和ICAM-1mRNA及其蛋白的表達(dá)：iCpG能夠

5、抑制缺血再灌注后E-selectin和ICAM-1mRNA及其蛋白的表達(dá)。缺血再灌注能夠促進(jìn)HIF-1αmRNA和ROCK-2mRNA的表達(dá)。(2)TLR9蛋白的表達(dá)：四組未有明顯變化。缺血再灌注能夠提高M(jìn)yD88蛋白的表達(dá)，而iCpG能夠抑制MyD88的上調(diào)。NF-kB在缺血再灌注后DNA結(jié)合活性升高，iCpG能夠抑制其活性的升高。（3）sICAM-1的血清水平在缺血再灌注后升高，iCpG能夠降低它的水平。缺血再灌注后血清中TNF-α

6、的水平升高，加入iCpG能夠使其下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1、缺血30min以上對(duì)肝臟產(chǎn)生較明顯的損害，并且促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)，縮短荷瘤小鼠的生存時(shí)間。
　　2、iCpG能夠減輕肝臟缺血再灌注損傷。iCpG能夠減輕缺血再灌注后肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)。
　　3、TLR9水平的表達(dá)水平在缺血再灌注后并不增加，iCpG也并不能調(diào)低它的表達(dá)。但iCpG能通過(guò)抑制MyD88的表達(dá)，抑制NF-kB的活性，降低缺血再灌注后E-sel