Toll樣受體信號(hào)通路在一氧化氮預(yù)處理對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷保護(hù)過(guò)程中的作用.pdf

1、第一部分短時(shí)長(zhǎng)吸入一氧化氮預(yù)處理對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
　　目的:探討吸入不同時(shí)長(zhǎng)的低濃度一氧化氮(NO)預(yù)處理對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷的影響和機(jī)制。
　　背景:NO可以參與體內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié),具有舒張血管和局部抗炎的功能。實(shí)驗(yàn)證明,吸入低濃度NO預(yù)處理對(duì)肺缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用,但尚無(wú)關(guān)于NO預(yù)處理減輕肺缺血再灌注損傷最佳吸入時(shí)長(zhǎng)的研究報(bào)道,本研究應(yīng)用小鼠肺缺血再灌注損傷模型,探討NO預(yù)處理吸入的

2、最佳時(shí)長(zhǎng)。
　　方法和結(jié)果:6-8周雄性C57BL小鼠,分為空白組(S組),缺血再灌注損傷組(I/R組),NO預(yù)處理1min組(NO1-min組),NO預(yù)處理10min組(NO10-min組),NO預(yù)處理60min組(NO60-min組),分別于再灌注損傷后6h采集標(biāo)本,檢測(cè)肺動(dòng)脈血氧分壓(PaO2),肺組織干/濕重比(W/D),髓過(guò)氧化酶(MPO)活性,肺損傷組織學(xué)評(píng)價(jià)等指標(biāo);取NO預(yù)處理的最佳吸入時(shí)長(zhǎng),比較各組肺組織中Toll

3、樣受體2和4(TLR2/4)的基因及蛋白水平的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)各組血清中TNF-α的表達(dá)變化。與I/R組比較,NO1-min組肺缺血再灌注損傷無(wú)改善(P>0.05);NO10-min組與NO60-min組對(duì)肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用相似(P>0.05);NO10-min組TLR2/4基因及蛋白水平表達(dá)較I/R組降低(P<0.05);
　　結(jié)論:短時(shí)長(zhǎng)(10min)吸入低濃度NO預(yù)處理可以改善小鼠肺缺血再灌注損傷,但其保護(hù)程度不與NO預(yù)

4、處理時(shí)長(zhǎng)成正比;NO預(yù)處理可以抑制肺缺血再灌注損傷引起的TLR2/4表達(dá)的激活,減輕炎癥反應(yīng)。
　　第二部分應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)Toll樣受體信號(hào)通路在一氧化氮對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷保護(hù)過(guò)程中的變化
　　目的:應(yīng)用Real-TimePCR基因芯片技術(shù)檢測(cè)Toll樣蛋白受體信號(hào)通路在一氧化氮(NO)對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用過(guò)程中的變化,以明確NO肺保護(hù)的新作用機(jī)制。
　　背景:吸入低濃度NO預(yù)處理對(duì)肺缺血再灌注損傷

5、具有保護(hù)作用,在本文第一部分研究中發(fā)現(xiàn)吸入NO預(yù)處理的肺保護(hù)過(guò)程中,Toll樣蛋白受體2/4的表達(dá)激活被明顯抑制;功能性Real-TimePCR基因芯片技術(shù),其靈敏度,重復(fù)性,特異性均較第一代基因譜芯片技術(shù)有較大的提高和改進(jìn),因此我們應(yīng)用該項(xiàng)技術(shù),了解Toll樣蛋白受體信號(hào)通路在NO預(yù)處理的肺保護(hù)過(guò)程中的變化。
　　方法和結(jié)果:6-8周雄性C57BL小鼠,分為空白組(S組),缺血再灌注損傷組(I/R組),NO預(yù)處理10min組(N

6、O10-min組),分別于再灌注損傷后6h采集標(biāo)本(每組3只),應(yīng)用Real-TimePCR基因芯片技術(shù)檢測(cè)Toll樣蛋白受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的91個(gè)基因表達(dá)譜變化。結(jié)果顯示,與I/R組相比,NO10-min組Toll樣蛋白受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的83個(gè)基因表達(dá)下調(diào),其中Toll樣蛋白受體1/2/4/8/9,銜接蛋白MyD88,效應(yīng)分子IRAK1,下游通路及靶基因IKBKB、IRF3、NFKB2、NFRKB、MAP3K1(MEKK)、

7、IFNB1、NFKB1等31個(gè)基因表達(dá)下調(diào)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:在低濃度吸入NO預(yù)處理小鼠肺缺血再灌注損傷過(guò)程中,Toll樣蛋白受體信號(hào)通路的激活被明顯抑制,提示NO可以通過(guò)抑制Toll樣蛋白受體信號(hào)通路的激活起到減輕肺損傷的作用。
　　第三部分Toll樣受體信號(hào)通路參與一氧化氮預(yù)處理對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
　　目的:應(yīng)用基因敲除小鼠(MyD88-/-),建立小鼠肺缺血再灌注模型,探討T

8、oll樣蛋白受體信號(hào)通路是否參與一氧化氮(NO)對(duì)小鼠肺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　背景:吸入低濃度NO預(yù)處理對(duì)肺缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用,本實(shí)驗(yàn)組研究發(fā)現(xiàn)吸入NO預(yù)處理的肺缺血再灌注損傷保護(hù)過(guò)程中,Toll樣蛋白受體信號(hào)通路的基因水平表達(dá)激活被明顯抑制,其中作為該信號(hào)通路核心樞紐的MyD88分子,表達(dá)抑制明顯。
　　方法和結(jié)果:6-8周雄性C57BL小鼠(MyD88+/+),分為空白組(S組),缺血再灌注損

9、傷組(I/R組),NO預(yù)處理10min組(NO10-min組);6-8周雄性MyD88-/-基因敲除小鼠(以C57BL為遺傳背景),分為空白組(S組),缺血再灌注損傷組(I/R組),NO預(yù)處理10min組(NO10-min組),分別于再灌注損傷后6h采集標(biāo)本(每組5只),RT-PCR檢測(cè)Toll樣受體2/4,TRAF6,IRF3的基因水平表達(dá)變化,及ELISA檢測(cè)TNF-α,IL-6的蛋白水平表達(dá)變化。結(jié)果顯示,MyD88+/+及MyD