雞傳染性支氣管炎病毒部分S基因的原核表達(dá)及其抗體的間接ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的雞的急性、高度接觸性的呼吸道和泌尿生殖道疾病。雞傳染性支氣管炎病毒的常規(guī)檢測(cè)方法是利用雞傳染性支氣管炎病毒總蛋白做為抗原，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)來(lái)檢測(cè)IBV抗體。然而，病毒總蛋白的制備繁瑣耗時(shí)。雞傳染性支氣管炎的病毒中，病毒結(jié)構(gòu)蛋白包括纖突蛋白(S)、核蛋白(N)、膜蛋白(M)。其中，S蛋白與中和作用相關(guān)。因此，本試驗(yàn)克隆并表達(dá)S的部分保守基因片段(Sp)，建立了

2、以Sp蛋白為抗原的IBV抗體間接ELISA檢測(cè)方法，為IBV ELISA診斷試劑盒的研制奠定了基礎(chǔ)。 以提取的IBV總RNA為模板，根據(jù)原核表達(dá)載體pET-His設(shè)計(jì)含有BamHI和HidⅢ酶切位點(diǎn)的引物，通過(guò)RT-PCR的方法克隆擴(kuò)增出Sp基因。將擴(kuò)增出的Sp基因以及空表達(dá)載體pET-His進(jìn)行BamHI和HidⅢ雙酶切，然后將Sp基因克隆于原核表達(dá)載體pET-His。將重組表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。重組蛋

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