[二-(4-氯苯甲酰異羥肟酸)二正丁基合錫](DBDCT)與CYP450相互作用的初步研究.pdf

1、背景：[二-(4-氯苯甲酰異羥肟酸)二正丁基合錫](DBDCT)是一種新型的抗腫瘤化合物，課題組前期對DBDCT體內(nèi)代謝與藥動學研究表明：DBDCT在大鼠體內(nèi)吸收迅速、良好并廣泛代謝，在尿液和糞便均未檢測到原形藥物，進入機體的DBDCT可能主要經(jīng)肝微粒體酶代謝轉化，大部分經(jīng)腎或膽汁排出。
　　 目的：本論文擬采用大鼠肝微粒體體外孵育實驗，系統(tǒng)研究DBDCT在大鼠肝微粒體內(nèi)的代謝情況，確定細胞色素P450(CYP450)在DBDC

2、T代謝中的作用，闡明DBDCT對大鼠CYP450的影響，為理解該藥代謝的機制、預測藥物相互作用和藥物代謝多態(tài)性以及指導臨床合理用藥提供依據(jù)。
　　 方法：采用差速離心法制備了大鼠的肝微粒體，用紫外可見分光光度法測定肝微粒體蛋白濃度及細胞色素P450含量，建立了測定大鼠肝微粒體樣品中DBDCT濃度的HPLC法和大鼠肝微粒體體外代謝研究模型。以DBDCT為底物研究了該藥在大鼠肝微粒體中的代謝行為；為了鑒定參與DBDCT代謝的CYP4

3、50同工酶，考察了CYP450專屬性誘導劑和抑制劑對該反應的影響；分別以非那西丁、雙氯芬酸鈉、奧美拉唑和硝苯地平為底物評價大鼠CYP1A、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4的活性，以考察DBDCT對大鼠CYP450的作用。
　　 結果：對大鼠肝微粒體進行誘導，測定肝微粒體蛋白濃度及細胞色素P450含量，各誘導組與空白組比較，含量均有顯著性差異。建立了測定大鼠肝微粒體樣品中DBDCT濃度的HPLC法，本法線性范圍為3.48

4、～174.20μmol·L-1，最低定量濃度為3.48μmol·L-1，檢測限為0.73μmol·L4，方法簡便、快速、準確、重現(xiàn)性好，可適用于DBDCT的體外代謝研究。根據(jù)Michaelis-Menten方程和Eadie-Hofstee制圖法求得最大反應速率(即縱軸的截距)Vmax=2.813μmol·(min·mg)-1，米氏常數(shù)(即直線斜率)Km=159.07μmol·L-1和肝清除率Clin=Vmax/Km=0.017L·(mi

5、n·mg)-1。DBDCT在不同酶源中的體外代謝結果提示：PB、DEX誘導組和空白對照組比較有顯著性差異，而BNF組和空白對照組無明顯差異；將DBDCT分別于各種CYP亞型的專屬抑制劑體外共孵育，以確證介導DBDCT代謝的主要酶系，結果顯示酮康唑對DBDCT的代謝有較強的抑制作用；此外，磺胺甲噁唑對DBDCT的代謝也有一定的抑制，而氟伏沙明、甲氧芐氨嘧啶和奧美拉唑對DBDCT的代謝抑制作用較弱；底物試驗中，硝苯地平在DBDCT處理過的鼠

6、肝微粒體中代謝明顯減弱，與空白組有明顯差異(P＜0.01，P＜0.001)，非那西丁、雙氯芬酸鈉和奧美拉唑在空白和DBDCT處理過的鼠肝微粒體中代謝無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論：DBDCT在大鼠肝微粒體中代謝較快，提示該藥可能肝首過效應較強。通過DBDCT在不同酶源中的體外代謝試驗和代謝抑制試驗證明CYP3A4在催化DBDCT代謝中起了主導作用，CYP2C9可能部分參與，而CYP1A對DBDCT的代謝無明顯催化作用；