“山慈菇-露蜂房”抗乳腺癌轉(zhuǎn)移作用及機(jī)制研究.pdf

1、　　目的：乳腺癌是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤,占女性腫瘤發(fā)病的首位。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率亦是逐年升高,且有年輕化趨勢(shì)。乳腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致最終治療失敗甚至死亡的主要原因。研究顯示,乳腺癌轉(zhuǎn)移與表皮生長(zhǎng)因子受體( Epidermal Growth Factor Receptor； EGFR )/基質(zhì)金屬蛋白酶( Matrix Metalloproteinases , MMPs )分子信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)密切相關(guān)。山慈菇、露蜂房都具有清熱解毒、化

2、痰散結(jié)、消腫止痛的功效,在臨床中已被廣泛應(yīng)用,具有抗癌作用強(qiáng)、毒副作用小的特點(diǎn),是防治乳腺癌轉(zhuǎn)移的基本藥對(duì)。本研究旨在通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察中藥藥對(duì)“山慈菇-露蜂房”大鼠含藥血清對(duì)人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA-MB-231 增殖抑制作用,并檢測(cè)藥物血清對(duì) MDA-MB-231 細(xì)胞中 EGFR、MMP-9、TIMP-1基因表達(dá)的影響,探討“山慈菇-露蜂房”的抗乳腺癌轉(zhuǎn)移作用及機(jī)理,以求為臨床提供抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的有效方藥。
　　方法：1、

3、選用 SD雌性大鼠 30只,按文獻(xiàn)方法制備 5 組大鼠含藥血清,每組 6 只,分別為生理鹽水組、“山慈菇-露蜂房”低劑量組(4.5g/kg)、中劑量組(9g/kg)、高劑量組(18g/kg)、ADM組(9mg/kg·d)；2、應(yīng)用MTT法檢測(cè)各組含藥血清對(duì)人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響；3、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)“山慈菇-露蜂房”含藥血清對(duì)人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 MDA-MB-231 EGF

4、R、MMP-9、TIMP-1 基因表達(dá)的影響,并同時(shí)檢測(cè)內(nèi)參照β-actin基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1 MTT比色法檢測(cè)各組含藥血清對(duì)細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用
　　1.1 MTT比色法檢測(cè)各組含藥血清對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的影響
　　與生理鹽水組比較,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),“山慈菇-露蜂房”低、中、高劑量組、阿霉素組均能使細(xì)胞生長(zhǎng)曲線下降,下降幅度依次由小到大。其中,24~48h時(shí),中

5、藥大劑量組和阿霉素組含藥血清對(duì)曲線的影響基本相同；48~72h 時(shí),曲線下降的幅度中藥大劑量組略大于阿霉素組；72~120h,阿霉素組大于中藥大劑量組。
　　1.2 MTT比色法檢測(cè)各組含藥血清對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞殺傷情況
　　用 MTT 比色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),三個(gè)劑量組的“山慈菇-露蜂房”含藥血清對(duì)MDA-MB-231 細(xì)胞均有顯著增殖抑制作用,而且有一定的劑量-時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。從24h-120h,劑量從小到大,對(duì)M

6、DA-MB-231 細(xì)胞抑制率由14.99%~20.21% 增至 21.31%~45.82%。
　　2 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR)法檢測(cè)各組藥物血清對(duì)人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA-MB-231 EGFR、MMP-9、TIMP-1基因表達(dá)的影響
　　2.1 10個(gè)生理鹽水組樣本中有8個(gè)EGFR基因呈高水平表達(dá),其余2個(gè)呈低水平表達(dá)；10 個(gè)“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有 9個(gè) EGFR 基因呈低水平表達(dá),其

7、余1個(gè)呈高水平表達(dá)；
　　2.2 10 個(gè)生理鹽水組樣本有 7個(gè) MMP-9 基因呈高水平表達(dá),其余 3 個(gè)呈低水平表達(dá)；10個(gè)“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有8個(gè)MMP-9基因呈低水平表達(dá),其余2個(gè)呈高水平表達(dá)；
　　2.3 10個(gè)生理鹽水組樣本有8個(gè)TIMP-1基因呈低水平表達(dá),其余2個(gè)呈高水平表達(dá)；10個(gè)“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有8個(gè)TIMP-1基因呈高水平表達(dá),其余2個(gè)呈低水平表達(dá)。
　　

8、結(jié)論：
　　1 “山慈菇-露蜂房”對(duì)人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA-MB-231有抑制作用,在一定劑量范圍內(nèi),呈劑量正相關(guān)。
　　2 “山慈菇-露蜂房”可以下調(diào)MDA-MB-231細(xì)胞體外EGFR、MMP-9基因表達(dá),上調(diào)TIMP-1表達(dá)。
　　3 “山慈菇-露蜂房”具有抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用,其作用機(jī)制可能為：①抑制腫瘤EGFR基因表達(dá),抑制MMP的逆轉(zhuǎn)錄合成；②改變MMP-9/TIMP-1比值,影響MMP-9的