先天性無陰道患者HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性研究及乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后隨訪.pdf

1、先天性無陰道(MRKHS)是原發(fā)性閉經(jīng)的第二大原因，目前其病因尚不清楚，多認(rèn)為該病是一種多基因多因素遺傳性疾病。MRKHS患者無陰道，幾乎均合并無子宮，因而不能進(jìn)行性交、無生育能力，故嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。針對本病的治療主要是陰道成形術(shù)，乙狀結(jié)腸法陰道成形術(shù)是臨床應(yīng)用較多的一種術(shù)式。目前，國內(nèi)相關(guān)的文獻(xiàn)多為陰道成形術(shù)術(shù)式方面的報(bào)道，針對：MRKHS的病因及術(shù)后隨訪方面的研究較少。本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下三部分： 第一部分：先天

2、性無陰道患者HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性研究目的：研究HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性與先天性無陰道遺傳易感性的相關(guān)性，為尋找先天性無陰道的易感基因提供線索。 方法： 2005年10月～2007年1月，在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院就診及隨訪的MRKHS患者中選取研究對象。MRKHS組(研究組)：選擇河北省籍漢族患者30例，患者染色體核型應(yīng)為46，XX；對照組：在河北省血液中心骨髓庫中隨機(jī)選取300例，為河北省籍、漢族、

3、健康、無親緣關(guān)系的女性。取患者2mL外周血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝，用離心柱法提取DNA，進(jìn)行擴(kuò)增、雜交后使用流式雜交儀luminex<'100>分析樣品，即用流式磁珠法PCR-SSOP技術(shù)檢測樣品中的HLA-A、DRB1等位基因位點(diǎn)。用SASv6.12統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，采用X<'2>檢驗(yàn)、Fisher確切概率法分析，P<0.05為差異有顯著性，對于兩組差異有顯著性的基因計(jì)算其疾病比值比(OR)。結(jié)果1 HLA-A基因分型

4、：MRKHS患者的HLA-A基因共檢出11個(gè)位點(diǎn)，其中HLA-A<'*>33等位基因頻率為0.1167，明顯高于對照組的0.0300，差異有顯著性(P<0.05)，OR>1；HLA-A<'*>24等位基因頻率為0.0667，明顯低于對照組的0.1717，差異有顯著性(P<0.05)，OR<1。 2 HLA-DRB1基因分型： MRKHS患者的HLA-DRB1基因檢出12個(gè)位點(diǎn)，HLA-DRB1<'*>13等位基因頻率為0.133

5、3，明顯高于對照組的基因頻率0.0217，差異有顯著性(P<0.05)，OR>1。 結(jié)論： 中國河北省漢族人群中，HLA-A<'*>33、HLA-DRB1<'*>13等位基因與先天性無陰道的發(fā)生可能存在正相關(guān)，為進(jìn)一步探尋先天性無陰道的易感基因提供了線索。 第二部分先天性無陰道患者生活質(zhì)量及心理狀況調(diào)查分析目的：了解先天性無陰道(MRKHS)患者的生活質(zhì)量(QOL)及心理狀況。 方法：使用生活質(zhì)量綜合評定

6、問卷(GQOLI-74)、焦慮自評量表(SAS)和抑郁自評量表(SDS)，對43例MRKHS患者及43名正常對照進(jìn)行調(diào)查。采用SASv6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用t檢驗(yàn)(兩樣本方差不齊時(shí)做t’檢驗(yàn))、X<'2>檢驗(yàn)和相關(guān)分析，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： MRKHS組GQOLI-74的心理功能緯度評分低于正常對照組(59.15±13.12vs67.57±13.51)，社會(huì)功能緯度評分低于正常對照組(54.4

7、0±11.41 vs 62.90±12.40)，GQOLI-74總評分低于正常對照組(57.48±8.34 vs 62.82±9.79)，差異均有顯著性(P<0.01)。MRKHS患者的SAS平均得分為(45.98±10.32)，高于正常對照組(39.09±9.42)，差異有顯著性(P<0.01)，與GQOLI-74總評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.64，P=0.0001)，MRKHS組SDS平均指數(shù)為(0.50±0.13)，高于正常對照組(0

8、.41±0.11)，差異有顯著性(P<0.01)，與GQOLI-74總評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.65，P=0.0001)。 結(jié)論： 先天性無陰道患者的生活質(zhì)量較正常對照者差，易出現(xiàn)焦慮和抑郁癥狀。 第三部分乙狀結(jié)腸代陰道術(shù)后人工陰道粘膜的形態(tài)學(xué)改變及神經(jīng)型-氧化氮合酶表達(dá)的研究目的：觀察乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后人工陰道粘膜的形態(tài)學(xué)改變及粘膜內(nèi)神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)表達(dá)的變化，探討結(jié)腸移位后的形態(tài)學(xué)改變及nNO

9、S表達(dá)變化與人工陰道分泌物減少的相關(guān)性。 方法： 在2005年10月～2007年1月隨訪到的乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后的患者中選取研究對象，取得患者知情同意后，有10例患者自愿參加本項(xiàng)研究。在MRKHS組的人工陰道上段(陰道上1/3)及下段(距陰道口約3cm處)分別活檢留取移位的乙狀結(jié)腸粘膜標(biāo)本。對照組標(biāo)本取自2005～2006年間行乙狀結(jié)腸代陰道術(shù)的患者的正常乙狀結(jié)腸。標(biāo)本經(jīng)HE染色后在光鏡下觀察術(shù)后移位的乙狀結(jié)腸粘膜的形

10、態(tài)學(xué)變化；隨機(jī)選取3例人工陰道上段標(biāo)本進(jìn)行電鏡觀察。采用免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本的nNOS表達(dá)情況。使用SASv6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用Fisher確切概率法檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1 一般情況：MRKHS組的標(biāo)本取材距手術(shù)的間隔時(shí)間平均為27.6月；術(shù)后人工陰道分泌物開始減少的平均時(shí)間為7.5月；術(shù)后性生活史平均長約18.3月；人工陰道PH值平均為7.9。 2 病理學(xué)檢查結(jié)果：光鏡下觀察MRKHS組的人工陰道上段粘

11、膜：粘膜上皮層無明顯變化，粘膜肌層肥厚增生，粘膜下層的神經(jīng)叢密度為3.6±1.5，高于對照組的1.7±0.8，差異有顯著性(P<0.05)。人工陰道下段粘膜：10<'->例中有7例發(fā)生鱗狀上皮化生，腺體數(shù)量明顯減少并萎縮，間質(zhì)成分增多，粘膜肌層及粘膜下層消失。 3 電鏡檢查結(jié)果：掃描電鏡：MRKHS組的代陰道乙狀結(jié)腸粘膜表面凹凸不平，杯狀細(xì)胞的分泌泡較少。透射電鏡：代陰道乙狀結(jié)腸粘膜的柱狀上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞內(nèi)均可見線粒體的部分嵴

12、和膜融合或消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有脫顆?，F(xiàn)象。 4 nNOS的表達(dá)變化：nNOS在MrKHS組及對照組的結(jié)腸粘膜中均有表達(dá)，MRKHS組人工陰道上段粘膜上皮中nNOS表達(dá)呈陽性，弱于對照組，差異有顯著性(P<0.05)，腺體上皮細(xì)胞中nNOS表達(dá)呈弱陽性，弱于對照組，差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論： 1 乙狀結(jié)腸代陰道成形術(shù)后移位的結(jié)腸粘膜的形態(tài)學(xué)變化與人工陰道分泌物的逐漸減少可能有相關(guān)性，這種形態(tài)學(xué)的變化可能與