貓薄荷再生體系建立及生物活性研究.pdf

1、貓薄荷為唇形科荊芥屬多年生草本植物，又名香霍、假荊芥、假蘇等，全草芳香，有驅(qū)鼠和驅(qū)蟲(chóng)功能。貓薄荷可藥用，葉和開(kāi)花枝端能治療感冒頭痛及頭皮瘙癢。是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的芳香植物。
　　本文一方面采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立貓薄荷再生體系，另一方面采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)貓薄荷揮發(fā)油化學(xué)組分進(jìn)行分析，并對(duì)貓薄荷揮發(fā)油的體外抑菌，毒性評(píng)價(jià)以及對(duì)蚊蠅的驅(qū)滅作用進(jìn)行研究，旨為貓薄荷的種植、開(kāi)發(fā)與利用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。研

2、究成果如下：
　　1．建立了貓薄荷再生體系。本文分別以貓薄荷的嫩葉、莖尖、側(cè)芽、莖段為外植體建立貓薄荷再生體系，結(jié)果表明：在研究范圍內(nèi)，以側(cè)芽為外植體誘導(dǎo)愈傷組織污染率最低，為13.3％，死亡率為10.9%，故誘導(dǎo)愈傷組織最適外植體為側(cè)芽；貓薄荷誘導(dǎo)不定芽的最佳培養(yǎng)基為6-BA2.5mg·L?1+ NAA1.0mg·L?1，貓薄荷誘導(dǎo)不定根的最佳培養(yǎng)基應(yīng)為IBA1.0mg·L?1+NAA1.0mg/L+6-BA0.6mg·L?1；

3、碳源以蔗糖濃度3%最佳。
　　2．采用水蒸汽蒸餾法，以影響貓薄荷揮發(fā)油提取的四個(gè)主要因子：樣品粒徑、浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間進(jìn)行正交試驗(yàn)，篩選貓薄荷揮發(fā)油提取的最佳工藝。結(jié)果表明：在研究范圍內(nèi)，浸泡時(shí)間10小時(shí)、加水量為貓薄荷質(zhì)量的10倍、提取時(shí)間為12小時(shí)、藥材粒徑為中等粒徑為較佳，其揮發(fā)油得率最高，為3.25mL·kg-1。
　　3．利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析了貓薄荷揮發(fā)油的化學(xué)組分。結(jié)果表明：揮發(fā)油中

4、鑒定了40種化合物：其中含倍半萜類物質(zhì)24種，占揮發(fā)油總量的58.44%，主要有(E)-β-金合歡烯（7.40%）、反式β-法尼烯（5.36%）、α-松油醇（4.25%）、α-蒎烯（3.63%）、桉油烯醇（3.13%）、桉葉油醇（2.57%）等。吲哚類物質(zhì)一種，為2-甲基吲哚啉。芳香族化合物一種，為3-羥基-4-甲氧基甲苯。脂肪族化合物共14種，占41.11%，主要有E，Z-假荊芥內(nèi)酯（17.14%）、Z，E-假荊芥內(nèi)酯（12.02%）

5、、花椒酯（0.65%）等。假荊芥內(nèi)酯（29.16%）為貓薄荷揮發(fā)油中最主要成分之一。
　　4．通過(guò)杯碟法研究了貓薄荷揮發(fā)油對(duì)常見(jiàn)霉菌和細(xì)菌的抑制作用，并測(cè)定了最小抑菌濃度。結(jié)果表明：貓薄荷揮發(fā)油對(duì)真菌和細(xì)菌都有一定的抑制作用。對(duì)細(xì)菌的抑制作用表明：貓薄荷揮發(fā)油對(duì)幾種細(xì)菌的抑制作用均較強(qiáng)，且貓薄荷揮發(fā)油對(duì)大腸桿菌和四聯(lián)桿菌的抑制作用優(yōu)于對(duì)枯草桿菌的抑制作用；貓薄荷揮發(fā)油對(duì)枯草桿菌的最小抑菌濃度（MIC）值為50%，對(duì)大腸桿菌和四聯(lián)桿

6、菌的MIC值都為25%。對(duì)霉菌的抑制作用表明：貓薄荷揮發(fā)油對(duì)根霉的抑制作用明顯優(yōu)于對(duì)黑曲霉的抑制作用，其中對(duì)根霉的MIC值為6.25%；而對(duì)黑曲霉的MIC值為75%。
　　5.通過(guò)急性口毒實(shí)驗(yàn)和皮膚毒理實(shí)驗(yàn)對(duì)貓薄荷做出毒性評(píng)價(jià)。急性口毒實(shí)驗(yàn)表明：小鼠死亡數(shù)隨揮發(fā)油劑量升高而增加，灌喂后小鼠均有不同程度的中毒表現(xiàn)，一周內(nèi)存活的小鼠均活動(dòng)正常。實(shí)驗(yàn)表明，貓薄荷揮發(fā)油的LD50為41.385g·kg-1,對(duì)小鼠的半數(shù)致死量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于15g

7、·kg-1，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于急性毒理毒性評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬于無(wú)毒性物質(zhì)。皮膚毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：皮膚刺激實(shí)驗(yàn)中，完好皮膚和破損皮膚均無(wú)紅腫、起泡等刺激性反應(yīng)。在致敏試驗(yàn)中，在給予過(guò)敏源后豚鼠未表現(xiàn)出過(guò)敏癥狀，根據(jù)皮膚刺激、過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分表判定，貓薄荷揮發(fā)油無(wú)刺激性、無(wú)致敏性，安全性良好。
　　6.研究了貓薄荷揮發(fā)油對(duì)白紋伊蚊和家蠅的驅(qū)避、觸殺作用。通過(guò)皮膚涂抹驅(qū)避試驗(yàn)測(cè)定對(duì)白紋伊蚊的驅(qū)避效果，結(jié)果表明：貓薄荷揮發(fā)油具有良好的蚊蟲(chóng)驅(qū)避性，驅(qū)蚊

8、效果隨著劑量的增加而增強(qiáng)，涂抹揮發(fā)油的實(shí)驗(yàn)小鼠的蚊蟲(chóng)停落次數(shù)明顯小于空白對(duì)照組。當(dāng)涂抹的揮發(fā)油劑量為1.12?L·cm-2時(shí)，其驅(qū)蚊效果即可達(dá)到六神驅(qū)蚊花露水相近效果，有效保護(hù)時(shí)間大約都為8h，此時(shí)的劑量小于國(guó)標(biāo)規(guī)定的1.5?L·cm-2，當(dāng)揮發(fā)油劑量增加到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的1.5?L·cm-2進(jìn)行涂抹試驗(yàn)時(shí)，有效保護(hù)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)10.6h，高于現(xiàn)有同類產(chǎn)品，驅(qū)蚊效果明顯。藥膜法研究貓薄荷揮發(fā)油對(duì)加蠅觸殺作用，結(jié)果表明，貓薄荷水提揮發(fā)油對(duì)家蠅有顯