胚鼠腹側(cè)中腦組織聯(lián)合胚腎組織腦內(nèi)移植治療帕金森病的實驗研究.pdf

1、目的:為提高移植的多巴胺能神經(jīng)元的存活率和促進(jìn)細(xì)胞生長,將胚鼠腹側(cè)中腦組織(VM)和胚腎組織聯(lián)合移植入PD大鼠腦內(nèi),觀察其療效,檢測胚腎組織對移植DA細(xì)胞的作用,從而為PD臨床治療提供一定的實驗依據(jù).方法:該實驗用神經(jīng)毒劑6-OHDA單側(cè)損毀SD大鼠左側(cè)中腦被蓋腹側(cè)區(qū)(VTA)和黑質(zhì)致密部(SNC)建立動物模型.取損毀后4周阿樸嗎啡(APO)誘導(dǎo)健側(cè)旋轉(zhuǎn)210圈/30分鐘的成功PD模型46只隨機分為兩個實驗組:實驗組 1:檢測移植多巴胺

2、能神經(jīng)元的存活率,取孕14天胚鼠腹側(cè)中腦組織和孕18天的胚鼠腎臟組織,分為VM1組(將VM組織預(yù)置于胚腎組織營養(yǎng)液中;N=6)和VM2組(將VM組織預(yù)置于DMEM營養(yǎng)液中;N=6),預(yù)置6小時后,將VM組織制成細(xì)胞懸液,用微量注射器立體定向植入PD大鼠毀損側(cè)尾殼核,于移植后1天處死,進(jìn)行TUNEL、TH染色和流式細(xì)胞儀檢測.實驗組 2:檢測移植多巴胺能神經(jīng)元的生長情況,分為VM單獨移植組(N=12);VM和胚腎組織聯(lián)合移植組(N=12)

3、;空白對照組(N=10).取孕14天胚鼠腹側(cè)中腦組織和孕18天胚鼠腎臟組織,分別制成細(xì)胞懸液和組織塊,用微量注射器立體定向植入PD大鼠毀損側(cè)尾殼核,空白對照組不移植.動物分別存活3、6個月,存活期間每兩周APO腹腔注射觀察動物旋轉(zhuǎn)行為變化并記錄.所有動物均用4％多聚甲醛灌注取腦,分別進(jìn)行TH和HE染色.結(jié)果:根據(jù)TUNEL、TH染色和流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果,VM1移植組較VM2移植組移植神經(jīng)元凋亡率降低,凋亡細(xì)胞數(shù)減少,THir陽性神經(jīng)元數(shù)

4、量明顯增多,證明胚腎組織確實具有營養(yǎng)作用,可明顯提高移植后多巴胺能神經(jīng)元的存活率.移植后3、6個月內(nèi),聯(lián)合移植組和單獨移植組大鼠旋轉(zhuǎn)行為均較正常對照組減少,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理P<0.05.免疫組化和組織學(xué)觀察聯(lián)合移植組和單獨移植組移植針道和針道周圍都可見THir陽性細(xì)胞及THir陽性纖維,前者無論是細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞體積和纖維密度均大于或高于后者.結(jié)論:1、胚腎組織具有明顯的營養(yǎng)作用.2、胚腎組織能夠明顯減少移植神經(jīng)元凋亡,促進(jìn)移植神經(jīng)元的存活.