氟達(dá)拉濱對阿糖胞苷增敏作用的研究.pdf

1、第一部分氟達(dá)拉濱、G-CSF在體外對阿糖胞苷藥物濃度的影響 目的：觀察加用粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF）、氟達(dá)拉濱（Fludarabine，F(xiàn)lu）后阿糖胞苷（cytarabine ,Ara-C）的藥物濃度變化。 方法：分別取對數(shù)生長期的HL-60、HL-60/R細(xì)胞，用12孔板，每孔加入2ml細(xì)胞，濃度為5×106/ml，按加藥方式不同將兩種

2、細(xì)胞株分為四組，單加Ara-C組（A組）、Flu與Ara-C聯(lián)合用藥組（FA組）、G-CSF與Ara-C聯(lián)合用藥組（GA組）、G-CSF、Flu與Ara-C聯(lián)合用藥組（FLAG組），于加藥后不同時(shí)間段應(yīng)用液相色譜串連質(zhì)譜儀（liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)測定培養(yǎng)液中Ara-C、Ara-U濃度。此外，收集了5例AML患者的骨髓細(xì)胞，

3、并對這些細(xì)胞進(jìn)行類似于細(xì)胞株的處理，用同樣方法檢測Ara-C、Ara-U濃度。 結(jié)果：①FA、GA、FLAG組培養(yǎng)液中Ara-C濃度低于A組（p＜0.05）。FLAG組培養(yǎng)液中Ara-C濃度低于FA組（p＜0.05），G-CSF先用24小時(shí)組培養(yǎng)液中Ara-C濃度低于G-CSF先用12小時(shí)組（p＜0.05）。②通過各組之間的比較發(fā)現(xiàn)，不同的用藥方式對細(xì)胞培養(yǎng)液中Ara-U濃度影響不大（p＞0.05）。③AML患者原代細(xì)胞在不同藥

4、物處理后，培養(yǎng)液中的Ara-C、Ara-U濃度變化不大（p＞0.05）。5名患者原代細(xì)胞培養(yǎng)液中Ara-C濃度無明顯區(qū)別，但均處于較高水平。 結(jié)論：對于HL-60和HL-60/R細(xì)胞株而言，氟達(dá)拉濱、G-CSF都能使更多的Ara-C轉(zhuǎn)入到細(xì)胞內(nèi)，使之轉(zhuǎn)變成有活性的Ara-CTP，而其中FLAG優(yōu)于FA,G-CSF 24小時(shí)組優(yōu)于12小時(shí)組。 第二部分FLAG方案在體外對細(xì)胞存活率影響的研究 目的：由阿糖胞苷（cy

5、tarabine ,Ara-C）、粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF）、氟達(dá)拉濱（Fludarabine，F(xiàn)lu）組成的FLAG方案已常規(guī)用于急性白血病的治療，尤其是復(fù)發(fā)難治白血病。本實(shí)驗(yàn)通過HL-60、HL-60/R細(xì)胞株及8例AML患者的骨髓細(xì)胞存活率（leukemic cell survival，LCS）的變化，觀察Ara-C、G-CSF、Flu相互之間的作用

6、。 方法：分別取對數(shù)生長期的HL-60、HL-60/R細(xì)胞株，用96孔板，每孔加入180ul細(xì)胞，濃度為1×106/ml，將2種細(xì)胞株均分為三組，單藥組（單加Ara-C或Flu）、聯(lián)合用藥組（Flu＋Ara-C）、加用G-CSF組（G-CSF+Ara-C、G-CSF+Flu、G-CSF+ Flu＋Ara-C），于加藥后不同時(shí)間段采用噻唑藍(lán)（MTT）還原法檢測細(xì)胞存活率，同時(shí)用流式細(xì)胞儀測定加G-CSF后細(xì)胞周期的變化。此外，收集

7、了8例AML患者的骨髓細(xì)胞，并對這些細(xì)胞進(jìn)行類似于細(xì)胞株的處理，用同樣方法檢測了原代細(xì)胞的存活率。 結(jié)果：①細(xì)胞加用G-CSF孵育24小時(shí)后，S期細(xì)胞百分比HL-60從（54.73±0.95）％到（59.04±1.64）％(p＜0.05），HL-60/R從(45.17±2.02)％到（51.74±2.43）％(p＜0.05）;而用G-CSF孵育12小時(shí)S期細(xì)胞百分比變化不大（p＞0.05）。②無論是HL-60或是HL-60/R，

8、Flu、Ara-C兩者聯(lián)合用藥細(xì)胞存活率低于單藥組（p＜0.05），尤其對于HL-60/R聯(lián)合用藥組細(xì)胞存活率明顯低于單藥組（p＜0.01）。③G-CSF與Ara-C聯(lián)合應(yīng)用與單用Ara-C比較，無論是HL-60還是HL-60/R，發(fā)現(xiàn)G-CSF先孵育24小時(shí)，細(xì)胞存活率低于單用Ara-C（p＜0.05），而先孵育12小時(shí)，細(xì)胞存活率與單用Ara-C相比無明顯差異（p＞0.05）。G-CSF與Flu聯(lián)合應(yīng)用與單用Flu比較，發(fā)現(xiàn)無論G-

9、CSF先孵育24小時(shí)或12小時(shí)，對HL-60或是HL-60/R，細(xì)胞存活率無明顯變化（p＞0.05）。④FLAG與FA（Flu＋Ara-C）比較，我們發(fā)現(xiàn)無論先用G-CSF孵育24小時(shí)或12小時(shí)，對HL-60細(xì)胞的抑制作用均優(yōu)于FA（p＜0.05），而對HL-60/R細(xì)胞，無論是先用G-CSF孵育24小時(shí)或是12小時(shí)與FA比較，細(xì)胞存活率的變化無明顯區(qū)別（p＞0.05）。⑤通過8例AML患者原代細(xì)胞存活率的變化，我們發(fā)現(xiàn)對于2例復(fù)發(fā)病人

10、及3例初發(fā)病人FA及FLAG組細(xì)胞存活率低于Ara-C組（p＜0.05），而另3例初發(fā)病人細(xì)胞存活率Ara-C組與FA及FLAG組無明顯區(qū)別（p＞0.05）。在2例復(fù)發(fā)患者中FLAG與FA對細(xì)胞存活率的抑制作用，前者優(yōu)于后者（p＜0.05），而6例初發(fā)患者,兩者無明顯區(qū)別（p＞0.05）。 結(jié)論：①G-CSF提前24小時(shí)較提前12小時(shí)應(yīng)用可以使S期細(xì)胞明顯增加。②對于HL-60和HL-60/R細(xì)胞株而言，F(xiàn)lu或G-CSF都能增