去鐵敏干預SAH后溶酶體組織蛋白酶介導的早期腦損傷的實驗研究.pdf

1、目的：觀察大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH，Subarachnoid Hemorrhage）早期兩種主要的溶酶體組織蛋白酶Cathepsin B/D與凋亡蛋白caspase-3的時相性變化，探討溶酶體組織蛋白酶與早期腦損傷的關系，并分析去鐵敏（DFX）對其的干預及對早期腦損傷各項指標的影響，為研究蛛血后早期腦損傷的發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　方法：實驗1，30只健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為5組：對照組，S

2、AH12h，SAH24h，SAH48h和SAH72h組（n=6），各時間點處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標本，應用免疫組化法及Western bolt檢測Cathepsin B/D、caspase-3的蛋白表達，干濕法檢測腦水腫；實驗2，48只健康成年雄性SD大鼠隨機分為：對照組(n=12), SAH組(n=12), SAH+安慰劑組(n=12)和SAH+DFX治療組(n=12)。視交叉前池注血法(APC)制作SAH模型，對照組開骨窗但不

3、注入動脈血，DFX治療組給予DFX注射治療，每次注射劑量100mg/kg，在SAH后2h、12h、24h、36h分別腹腔注射，共注射4次。48小時后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標本。觀察SD大鼠行為功能變化，進行神經(jīng)功能評分，應用免疫組化法及Western bolt檢測Cathepsin B/D、caspase-3的蛋白表達，干濕法測定腦水腫，以IgG滲出評價血腦屏障(BBB)通透性改變， TUNEL技術測定神經(jīng)細胞凋亡。
　　結

4、果：實驗1，SAH組大鼠Cathepsin B/D及凋亡蛋白caspase-3在SAH后早期（12h）即有明顯表達，48 h達高峰，72h仍高于正常對照組，同時，腦組織水含量明顯增加，48h時水腫百分數(shù)達到83.7±0.44%；實驗2，與SAH+安慰劑組比較，應用DFX治療后, Cathepsin B/D及caspase-3的蛋白表達水平明顯下調(diào)，大鼠神經(jīng)功能明顯改善，腦水腫指數(shù)降低，血腦屏障功能改善，安慰劑組與SAH組相比改善不明顯(

5、P>0.05)。細胞凋亡結果顯示對照組腦組織中有細胞凋亡；與對照組相比，SAH+安慰劑組腦組織細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組（P<0.01）；SAH組與安慰劑組對比無明顯差異(P>0.05)；DFX治療組腦組織細胞凋亡指數(shù)明顯低于SAH組與安慰劑組（P<0.01）。
　　結論：溶酶體可能參與了蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷的過程，蛛網(wǎng)膜下腔出血后溶酶體膜可能被破壞，導致溶酶體組織蛋白酶（Cathepsin B/D）的釋放并誘發(fā)凋亡途徑。鐵鰲