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1、目的;觀察結(jié)合于Bcl-xlmRNA上低自由能區(qū)域的反義寡核苷酸對(duì)Bcl-xl基因的抑制效應(yīng),以及對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響 方法;基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低結(jié)合自由能區(qū)域,并針對(duì)這一區(qū)域合成反義核酸As587;轉(zhuǎn)染高表達(dá)Bcl-xl的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7;倒置顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率,RT-PCR檢測(cè)Bcl-xlmRNA水平;免疫
2、細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Bcl-xl蛋白表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡發(fā)生率。 結(jié)果;1.MCF-7細(xì)胞增殖受抑,且抑制效應(yīng)與寡核苷酸濃度、作用時(shí)間呈量效及時(shí)效關(guān)系 2.Bcl-xlmRNA及蛋白表達(dá)水平下降,細(xì)胞出現(xiàn)凋亡 結(jié)論;1.As587能抑制Bcl-xl基因的表達(dá),在體外能抑制乳腺癌細(xì)胞增殖 2.對(duì)于較短的mRNA,利用最小自由能原理對(duì)其設(shè)計(jì)反義核酸是一種可以信賴的方法,以此方法設(shè)計(jì)的反義核酸As58
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