藏豬幾個重要遺傳特性基因的研究.pdf

1、藏豬主要產(chǎn)于我國西藏、四川西部、云南西北部以及甘肅南部的農(nóng)區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)，是世界上分布在海拔最高地區(qū)(2500～4300m)的稀有放牧豬種之一。藏豬具有抗逆性強(qiáng)、肌肉纖維細(xì)、肌間脂肪含量高和肉質(zhì)風(fēng)味好等優(yōu)點；但同時存在產(chǎn)仔數(shù)低、生長緩慢和胴體瘦肉率低等不足。由于藏豬的生產(chǎn)性能低下，為了提高其生產(chǎn)性能，因而長期以來引進(jìn)其他豬種與之進(jìn)行雜交，導(dǎo)致其數(shù)量急劇減少，若不采取有效的措施，藏豬也會和許多其他地方豬種一樣瀕臨滅絕，其所攜帶的優(yōu)良基因，

2、在還沒有認(rèn)識其價值以前就永遠(yuǎn)從基因庫中消失。因此，有針對性開展藏豬遺傳特性方面的研究，對豬種資源的保護(hù)和開發(fā)利用具有重大的價值，對今后的新品種培育和品種復(fù)壯、實現(xiàn)養(yǎng)豬生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展具有十分重要的戰(zhàn)略意義。 由于藏豬分布在偏遠(yuǎn)高海拔山區(qū)和處于放牧的半野生狀態(tài)，因此采樣和測定研究工作難度大，目前國內(nèi)外對這一寶貴的豬種資源的研究很少，并且主要是集中在生長發(fā)育性能和血液蛋白多態(tài)性研究方面，有關(guān)藏豬抗病力、肌肉品質(zhì)和產(chǎn)仔數(shù)等特色性狀基因

3、方面的研究尚屬空白。天然抗性巨嗜細(xì)胞蛋白基因(NRAMP1)、心臟脂肪酸結(jié)合蛋白基因(H-FABP)和雌激素受體基因(ESR)是與抗病力、肌肉品質(zhì)和產(chǎn)仔數(shù)相關(guān)的侯選基因，藏豬的這3個基因尚未有人研究。因此，本論文選擇藏豬的NRAMP1、H-FABP和ESR基因進(jìn)行研究，以發(fā)掘藏豬的優(yōu)勢特色，為藏豬資源的保護(hù)和開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。首先，克隆了藏豬NRAMP1基因。從脾臟和血液白細(xì)胞樣品制備RNA后，用RT-PCR的方法克隆了藏豬NRAMP1

4、基因，序列分析發(fā)現(xiàn)其開放閱讀框長度為1614bp，編碼538個氨基酸殘基，其蛋白質(zhì)分子量為58.8kD，等電點為8.01，疏水氨基酸占52.8％，親水氨基酸占31.4％，堿性氨基酸占5.8％，酸性氨基酸占5.4％，該蛋白質(zhì)不含信號肽序列。預(yù)測的藏豬NRAMP1蛋白質(zhì)具有其他物種保守的所有結(jié)構(gòu)區(qū)域，包括1個富含脯氨酸和精氨酸的SH3結(jié)合域(SH3-binding domain)，4個PKC磷酸化位點(S/T-X-R/K)，2個N型糖基化位

5、點(N-X-S/T)，1個轉(zhuǎn)運(yùn)功能區(qū)(transport motif)和12個轉(zhuǎn)膜區(qū)域(TM)。將藏豬的.NRAMP1cDNA序列與家豬相應(yīng)序列比較，有13個位點發(fā)生了突變，其同源性達(dá)99.2％，但編碼的氨基酸序列完全相同。藏豬與狗、綿羊、牛、鹿、馬、人和鼠的NRAMP1cDNA之間的同源性分別為91.2％、88.7％、88.1％、86.8％、85.8％、83.2％和71.6％。 其次，采用半定量和定量PCR方法，對藏豬的10種

6、組織中NRAMP1基因的表達(dá)模式和表達(dá)水平進(jìn)行研究。結(jié)果表明，該基因在藏豬的10個組織以及白細(xì)胞中均獲得表達(dá)，不存在組織表達(dá)特異性。該基因在藏豬中表達(dá)比西方家豬更加廣泛，說明NRAMP1基因在不同的品種間可能存在差異。定量和半定量PCR結(jié)果進(jìn)一步證實了NRAMP1基因在藏豬中沒有組織表達(dá)特異性。該基因表達(dá)拷貝數(shù)平均為3233拷貝/μL cDNA，但各組織間表達(dá)豐度存在極大差異，表達(dá)量最高為脾臟，最低為肝臟，兩者相差77倍以上。各組織表達(dá)

7、豐度從高到低的順序是脾臟、大腦、肺、回腸、腎臟、淋巴結(jié)、結(jié)腸、心臟、肌肉和肝臟。上述測試結(jié)果為藏豬較其他豬種具有更強(qiáng)的抵抗力提供了間接證據(jù)。再其次，采用PCR-RFLP技術(shù)(限制內(nèi)切酶采用MspⅠ、HaeⅢ和HinfⅠ酶)檢測了96頭藏豬在H-FABP基因位點的遺傳變異。結(jié)果表明：藏豬H-FABP基因在HinfⅠ和MspⅠ酶切位點均具有多態(tài)性，分別表現(xiàn)為HH、Hh、hh和AA、Aa和aa基因型，其中，H和A等位基因的頻率分別為0.521

8、和0.406;在HaeⅢ位點無變異，均表現(xiàn)為DD型。 最后，采用PCR-RFLP技術(shù)檢測了96頭藏豬在ESR基因位點的遺傳變異，并分析了不同基因型對產(chǎn)仔數(shù)的影響。結(jié)果表明：在藏豬中只有AA和AB 2種基因型，沒有高產(chǎn)仔的優(yōu)勢基因型BB，其中，AA和AB基因型分布頻率分別為0.75和0.25，A、B等位基因的頻率分別為0.875和0.125，研究結(jié)果較好地解釋了藏豬產(chǎn)仔數(shù)不高的現(xiàn)象。藏豬不同ESR基因型產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)之間存在明顯