聯合阻斷共刺激通路抑制CD4+記憶性T細胞介導的加速性排斥反應的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開論述：
　　第一部分 兩種小鼠異位心臟移植模型的建立及比較
　　目的：TOMITA法和CORRY法兩種異位心臟移植模型的建立和比較。
　　方法：雄性近交系C57BL/6小鼠120只,供受體各60只，分別建立異位移植模型30例
　　結果：TOMITA法移植手術成功率96.7％，CORRY法手術成功率86.7%，兩組手術成功率無差異（P=0.3533）。頸部移植組受體手術時間與血管吻合時間均顯

2、著短于腹腔移植組（58.33±1.7min VS99.1±1.475 mins,7±0.418 VS45.23±1.22 mins,P<0.001）。兩組術后生存率無顯著差異（P=0.8942）。
　　結論：TOMITA法手術時間短，供心保護好，對受體整體狀態(tài)影響小，較適合于本課題移植免疫方面的研究。
　　第二部分 CD4+記憶性T細胞的誘導增殖、分離、純化及鑒定
　　目的：誘導產生并分離、純化出高活性CD4+Tm。并

3、對其表型、純度進行鑒定分析。
　　方法：通過BALB/C-C57BL/6小鼠異品系皮膚移植，誘導受體產生同種異體反應性Tm。再以磁珠分選技術，分離、純化出CD4+Tm。以流式細胞技術對其表型、純度進行鑒定分析。制備出高活性、高純度的CD4+Tm。
　　結果：皮膚移植90例，成功88例，成功率97.8%。分離所得的CD4+Tm活細胞比例為（91.3±0.6）%。致敏小鼠體內Tm比例達到72%，經磁珠純化后達到98.3%。(CD

4、4+CD44+CD62-CCR7-)T細胞比例大于93%。
　　結論：小鼠異品系皮膚移植可有效誘導受體產生同種異體反應性Tm。磁珠分選純化出表型為(CD4+CD44+CD62-CCR7-)的CD4+Tm具有高活性和高純度，可用于后續(xù)研究中的過繼性輸注。
　　第三部分 聯合阻斷CD28/B7,CD40/CD40L,ICOS/B7h和OX40/OX40L共刺激通路抑制CD4+記憶性T細胞介導的加速性排斥反應
　　目的：聯合

5、應用共刺激通路阻斷劑，全面阻斷記憶性T細胞的活化，抑制CD4+記憶性T細胞介導的加速性排斥反應。
　　方法：過繼性轉移CD4+記憶性 T細胞后建立小鼠同種異體心臟移植模型，再聯合阻斷CD28/B7,CD40/CD40L,ICOS/B7h和OX40/OX40L共刺激通路。觀察其對同種異體移植物存活、淋巴細胞增殖和相關基因表達的影響。
　　結果：①四聯阻斷組與二聯阻斷組和對照組相比供心存活時間顯著延長（P=0.0002，P=0.

6、0005），而二聯阻斷組和對照組相比供心存活時間無顯著差異（P=0.8040）。②移植7天后移植物排斥分級對照組為Grade4，二聯阻斷組為Grade3B，四聯阻斷組為Grade1A。③對照組與二聯用藥組脾細胞增殖程度明顯高于四聯用藥組。④移植物排斥相關基因的表達：相對于對照組，二聯用藥組的 IL-2、IFN-γ的相對表達量較低，并且四聯用藥組比二聯用藥組更低；四聯用藥組IL-4、IL-10表達水平明顯高于其它兩組。
　　結論：四