聯(lián)合阻斷共刺激通路抑制CD4+記憶性T細(xì)胞介導(dǎo)的加速性排斥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開論述：
　　第一部分 兩種小鼠異位心臟移植模型的建立及比較
　　目的：TOMITA法和CORRY法兩種異位心臟移植模型的建立和比較。
　　方法：雄性近交系C57BL/6小鼠120只,供受體各60只，分別建立異位移植模型30例
　　結(jié)果：TOMITA法移植手術(shù)成功率96.7％，CORRY法手術(shù)成功率86.7%，兩組手術(shù)成功率無差異（P=0.3533）。頸部移植組受體手術(shù)時(shí)間與血管吻合時(shí)間均顯

2、著短于腹腔移植組（58.33±1.7min VS99.1±1.475 mins,7±0.418 VS45.23±1.22 mins,P<0.001）。兩組術(shù)后生存率無顯著差異（P=0.8942）。
　　結(jié)論：TOMITA法手術(shù)時(shí)間短，供心保護(hù)好，對受體整體狀態(tài)影響小，較適合于本課題移植免疫方面的研究。
　　第二部分 CD4+記憶性T細(xì)胞的誘導(dǎo)增殖、分離、純化及鑒定
　　目的：誘導(dǎo)產(chǎn)生并分離、純化出高活性CD4+Tm。并

3、對其表型、純度進(jìn)行鑒定分析。
　　方法：通過BALB/C-C57BL/6小鼠異品系皮膚移植，誘導(dǎo)受體產(chǎn)生同種異體反應(yīng)性Tm。再以磁珠分選技術(shù)，分離、純化出CD4+Tm。以流式細(xì)胞技術(shù)對其表型、純度進(jìn)行鑒定分析。制備出高活性、高純度的CD4+Tm。
　　結(jié)果：皮膚移植90例，成功88例，成功率97.8%。分離所得的CD4+Tm活細(xì)胞比例為（91.3±0.6）%。致敏小鼠體內(nèi)Tm比例達(dá)到72%，經(jīng)磁珠純化后達(dá)到98.3%。(CD

4、4+CD44+CD62-CCR7-)T細(xì)胞比例大于93%。
　　結(jié)論：小鼠異品系皮膚移植可有效誘導(dǎo)受體產(chǎn)生同種異體反應(yīng)性Tm。磁珠分選純化出表型為(CD4+CD44+CD62-CCR7-)的CD4+Tm具有高活性和高純度，可用于后續(xù)研究中的過繼性輸注。
　　第三部分 聯(lián)合阻斷CD28/B7,CD40/CD40L,ICOS/B7h和OX40/OX40L共刺激通路抑制CD4+記憶性T細(xì)胞介導(dǎo)的加速性排斥反應(yīng)
　　目的：聯(lián)合

5、應(yīng)用共刺激通路阻斷劑，全面阻斷記憶性T細(xì)胞的活化，抑制CD4+記憶性T細(xì)胞介導(dǎo)的加速性排斥反應(yīng)。
　　方法：過繼性轉(zhuǎn)移CD4+記憶性 T細(xì)胞后建立小鼠同種異體心臟移植模型，再聯(lián)合阻斷CD28/B7,CD40/CD40L,ICOS/B7h和OX40/OX40L共刺激通路。觀察其對同種異體移植物存活、淋巴細(xì)胞增殖和相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①四聯(lián)阻斷組與二聯(lián)阻斷組和對照組相比供心存活時(shí)間顯著延長（P=0.0002，P=0.

6、0005），而二聯(lián)阻斷組和對照組相比供心存活時(shí)間無顯著差異（P=0.8040）。②移植7天后移植物排斥分級(jí)對照組為Grade4，二聯(lián)阻斷組為Grade3B，四聯(lián)阻斷組為Grade1A。③對照組與二聯(lián)用藥組脾細(xì)胞增殖程度明顯高于四聯(lián)用藥組。④移植物排斥相關(guān)基因的表達(dá)：相對于對照組，二聯(lián)用藥組的 IL-2、IFN-γ的相對表達(dá)量較低，并且四聯(lián)用藥組比二聯(lián)用藥組更低；四聯(lián)用藥組IL-4、IL-10表達(dá)水平明顯高于其它兩組。
　　結(jié)論：四