基于單克隆抗體的喹諾酮和磺胺類(lèi)獸藥ELISA研究.pdf

1、本論文制備了兩種能識(shí)別喹諾酮類(lèi)和磺胺類(lèi)獸藥的單克隆抗體，并建立了分別檢測(cè)喹諾酬類(lèi)和磺胺類(lèi)藥物的酶聯(lián)免疫法分析方法。
　　采用活化酯法直接將諾氟沙星與載體蛋白BSA偶聯(lián)，制備人工免疫原并免疫小鼠。將小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，通過(guò)篩選獲得雜交瘤細(xì)胞。應(yīng)用有限稀釋法進(jìn)行克隆，最終獲得一株能穩(wěn)定分泌識(shí)別喹諾酮類(lèi)藥物抗體的細(xì)胞株4C6F6D。亞型鑒定為:重鏈，IgG3，輕鏈，Kappa。通過(guò)優(yōu)化抗體包被量、酶標(biāo)抗原的稀釋倍數(shù)、封閉液

2、、pH等條件，建立了一種直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。該方法的靈敏度IC50=0.45±0.07μg/L，檢出限IC15=0.09±0.02μg/L。CIP、NAL、ENR、PEF、ENO、OFL、OXO、FLU、FLE和LOM的IC50值范圍為0.27-8.54μg/L，交叉反應(yīng)率為5.27-166.67％;MAR、SAR、DIF、GAT、PIP和SPA的IC50值范圍為14.21-88.13μg/L，交叉反應(yīng)率為0.51-3.17％。

3、>　　應(yīng)用活化酯法將兩種磺胺類(lèi)人工半抗原與載體蛋白KLH進(jìn)行偶聯(lián)，制備人工免疫原并免疫小鼠。將優(yōu)選后的小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選出雜交瘤細(xì)胞，最終獲得一株能穩(wěn)定分泌抗體的單克隆細(xì)胞株4E7G4D。亞型鑒定為:重鏈，IgG2a，輕鏈，Kappa。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法通過(guò)優(yōu)化異源和同源性包被原、包被量、抗體稀釋倍數(shù)、封閉液、pH等條件，建立了8種磺胺類(lèi)藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線。SQ、SCPA、SPMX、SMT、SME、SDDX、S

4、MX和STZ的IC50值范圍為3.22-398.36μg/L，交叉反應(yīng)率為0.81-100％。直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法通過(guò)優(yōu)化異源和同源性酶標(biāo)抗原、抗體包被量、酶標(biāo)稀釋倍數(shù)、封閉液、pH等條件，建立了8種磺胺類(lèi)藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線。SQ、SCPA、SPMX、SMT、SME、SDDX、SMX和STZ的IC50值范圍為4.58-497.73μg/L，交叉反應(yīng)率為0.92-100％。
　　本研究中所建立的喹諾酮類(lèi)和磺胺類(lèi)獸藥的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法靈敏