功勞木的抗腫瘤作用及其機制研究.pdf

1、目的：從中藥功勞木提取物中篩選具有抗腫瘤作用的活性成分，并探討活性成分的抗腫瘤作用機制。
　　 方法：采用MTT(3-(4，5-Dimethythiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-te-trazoliumbromide)法檢測功勞木提取物對人白血病K562細(xì)胞的增殖抑制作用，篩選抗腫瘤活性成分。通過吖啶橙/溴乙啶(Acridine orange/Ethidium BromideAO/EB)雙染法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

2、，羅丹明123(Rhodamine，Rh123)/Hoechst33342檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化，采用DCFH-DA/Hoechst33342熒光法結(jié)合高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平，以檢測功勞木活性成分K562細(xì)胞凋亡的影響。提取兔腦微管蛋白采用比濁發(fā)檢測功勞木活性成分對微管蛋白聚合-解聚的影響。
　　 結(jié)果：從功勞木提取物中篩選出兩種抗腫瘤活性成分，分別為藥根堿和小檗堿，其對K562細(xì)胞作用48h的IC50分

3、別為30.47μg/ml，15.36μ/ml。藥根堿、小檗堿作用K562細(xì)胞36h后，在形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡特征，且細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平明顯增加，細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位明顯降低，均呈濃度依賴性。體外兔腦微管蛋白聚合-解聚分析表明，藥根堿和小檗堿均能抑制微管蛋白的聚合，且藥根堿作用強于小檗堿。
　　 結(jié)論：從功勞木中提取的藥根堿和小檗堿對K562細(xì)胞生長具有明顯的增殖抑制作用并可誘導(dǎo)其凋亡。藥根堿和小檗堿可能通過阻礙線粒體內(nèi)信號傳