綿茵陳藥材的提取、精制工藝及其“譜效結(jié)合”評(píng)價(jià)研究.pdf

1、茵陳為《中華人民共和國藥典》(2005版)收載品種，是保肝利膽復(fù)方中常用中藥。目前在中藥制劑工藝中多采用傳統(tǒng)水煎工藝，個(gè)別制劑采用“水提醇沉”或乙醇滲漉工藝，未見對(duì)上述提取工藝評(píng)價(jià)的系統(tǒng)文獻(xiàn)研究。 現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展的背景下，在中藥制備工藝中適宜的引進(jìn)新的制劑技術(shù)，并對(duì)其作出科學(xué)的評(píng)價(jià)，對(duì)提高中成藥的技術(shù)含量和科學(xué)內(nèi)涵具有重要意義。 以單一成分保留率為指標(biāo)的常用工藝評(píng)價(jià)方式，應(yīng)用于多成分多部位的中藥具有局限性，籠統(tǒng)的有

2、效部位的評(píng)價(jià)方式具有模糊性。中藥指紋圖譜技術(shù)的發(fā)展為跟蹤評(píng)價(jià)中藥制劑工藝中藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的保留提供了更為精細(xì)的指標(biāo)。即使如此，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯空呷杂欣碛少|(zhì)疑，保留指紋圖譜相關(guān)成分的同時(shí)，新工藝的運(yùn)用是否保留了藥材的藥效。因此以“譜效結(jié)合”的方法，從物質(zhì)基礎(chǔ)和藥效學(xué)的角度跟蹤評(píng)價(jià)中藥制劑新工藝，具有更強(qiáng)的說服力。 本課題以綿茵陳藥材為載體，探索大孔樹脂吸附工藝的運(yùn)用及其科學(xué)評(píng)價(jià)的途徑。針對(duì)綿茵陳藥材的研究基礎(chǔ)，在建立綿茵陳藥材指紋圖譜和探

3、討藥材提取液中綠原酸穩(wěn)定性影響因素基礎(chǔ)上，以綿茵陳藥材指紋圖譜主峰保留率和保肝的藥效學(xué)評(píng)價(jià)為指標(biāo)，研究了綿茵陳提取工藝、大孔吸附樹脂精制工藝，主要研究內(nèi)容和成果如下： 1.綿茵陳藥材指紋圖譜的建立 采用反相高效液相色譜法建立綿茵陳藥材指紋圖譜，并進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)考察，對(duì)不同產(chǎn)地和批次綿茵陳藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。 2.綿茵陳藥材提取液中綠原酸穩(wěn)定性的影響因素研究 采用HPLC法測(cè)定綿茵陳藥材水提液、醇提液在不同

4、受熱時(shí)間和溫度，以及不同pH條件下綠原酸的含量變化。結(jié)果表明，受熱溫度和pH是影響其中綠原酸穩(wěn)定性的重要因素。提示在該藥材提取、濃縮、干燥工藝過程中應(yīng)關(guān)注受熱溫度和pH對(duì)綠原酸保留率的影響。 3.綿茵陳藥材的提取工藝研究 選擇綿茵陳藥材指紋圖譜中代表不同極性的綠原酸峰、8號(hào)峰和13號(hào)峰為指標(biāo)成分，以三種成分的提取率進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)分，對(duì)提取次數(shù)進(jìn)行考察的基礎(chǔ)上；再采用四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法考察綿茵陳藥材的提取工藝參數(shù)

5、；進(jìn)一步以抗急性肝損傷的藥效學(xué)研究，對(duì)所選優(yōu)化工藝與傳統(tǒng)水提工藝進(jìn)行比較。結(jié)果表明，綿茵陳藥材提取的優(yōu)化工藝參數(shù)為10倍量、8倍量、8倍量的80％乙醇各提取1次，每次1h；ALT和AST以及病理學(xué)指標(biāo)的比較表明綿茵陳醇提工藝有優(yōu)于水提工藝的趨勢(shì)。 4.綿茵陳藥材的大孔樹脂精制工藝研究 本課題先以靜態(tài)吸附法確定樹脂種類及吸附工藝影響因素。以吸光度和綠原酸的比吸附量為指標(biāo)，考察不同樹脂的吸附效果和綿茵陳提取液在F樹脂的吸附時(shí)

6、間曲線；采用析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)，考察上柱藥液濃度和pH對(duì)綠原酸吸附的影響；以綿茵陳提取液和洗脫液的HPLC指紋圖譜為指標(biāo)，考察其精制效果。結(jié)果表明，不同樹脂對(duì)綿茵陳提取液中成分的吸附效果有差異，F(xiàn)型樹脂吸附效果最佳；綿茵陳提取液在F型樹脂的吸附平衡時(shí)間為6h；上柱藥液濃度和pH是影響吸附的重要因素。該結(jié)果可為綿茵陳提取液的大孔樹脂精制工藝路線的確定提供依據(jù)。 在以上研究基礎(chǔ)上，以綿茵陳藥液中綠原酸、吸光度結(jié)合HPLC指紋圖譜為指標(biāo)，考

7、察其在F樹脂的動(dòng)態(tài)吸附及洗脫過程，確定最大上樣量以及洗脫溶媒種類和用量。結(jié)果表明，綿茵陳提取液在該樹脂的最大上樣量以綠原酸計(jì)為20.9mg/g干樹脂，并確定3倍柱體積80％乙醇為洗脫溶媒；重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明該工藝在有效保留HPLC指紋圖譜主峰的同時(shí)，使提取液的得膏率由17％降低到2.5％，該精制工藝路線達(dá)到了富集有效成分的目的。 5.“譜效結(jié)合”方法對(duì)綿茵陳精制工藝的評(píng)價(jià)研究 以HPLC指紋圖譜的主峰保留率為指標(biāo)，對(duì)綿茵陳

8、提取液的精制工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)；建立CCL4致小鼠急性肝損傷模型，測(cè)定血清中ALT、AST等指標(biāo)，并對(duì)其肝組織切片進(jìn)行病理學(xué)觀察，對(duì)綿茵陳提取液精制前后的保肝作用進(jìn)行比較；進(jìn)行小鼠灌胃給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)，考察綿茵陳提取液精制前后口服給藥的安全性差異。結(jié)果表明，綿茵陳提取液精制前后的HPLC指紋圖譜基本一致；綿茵陳提取液精制前后的保肝作用無顯著差異；綿茵陳提取液精制前后均未發(fā)現(xiàn)明顯的急性毒性反應(yīng)。 以上研究結(jié)果，初步表明通過優(yōu)化綿茵陳藥