兩面針藥材抑菌“譜-效”的關(guān)系研究.pdf

1、我國中藥歷史悠久，功效顯著，我國現(xiàn)行中藥質(zhì)量評價的通用模式是將已知的主要成分作為指標予以檢測。這種模式只考慮了中藥所含眾多復(fù)雜成分中的個別成分，忽略了諸多成分間的協(xié)同作用和拮抗作用，因而難以客觀有效地評價中藥的內(nèi)在質(zhì)量，還使中藥的摻偽造假有機可乘。于是，中藥指紋圖譜作為一種能較全面反映中藥所含化學物質(zhì)存在狀態(tài)的質(zhì)量評價模式應(yīng)運而生，目前已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效手段，是能夠為國內(nèi)外廣泛接受的一種中藥質(zhì)量評價模式。但當

2、前中藥指紋圖譜技術(shù)所展示的還只是其中化學成分群的存在狀態(tài)而已，尚不能闡述其與中藥功效的相關(guān)性。要真正實現(xiàn)客觀有效地評價中藥質(zhì)量，除對其中的化學成分用指紋圖譜技術(shù)予以表達外，還須進一步開展指紋圖譜與藥效相關(guān)性的研究，從而建立一種能夠通過測定中藥色譜指紋圖譜而預(yù)測其藥效的質(zhì)量評價新模式，即“譜-效”相關(guān)模式。
　　 目的：
　　 以蕓香科植物兩面針Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.為研究對象，構(gòu)建兩面針

3、藥材的化學指紋圖譜。以金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌5種細菌為藥效模型，進行藥效學試驗，獲得兩面針藥材化學指紋圖譜的量化特征和藥效學數(shù)據(jù)。在此基礎(chǔ)上，采用后退逐步回歸統(tǒng)計學分析方法，尋找兩面針藥材“化學譜”—“藥效”之間的對應(yīng)關(guān)系。
　　 方法：
　　 1.兩面針藥材抑菌活性部位和提取工藝的篩選分別采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水4種溶劑對兩面針藥材進行提取，得到不同極性溶劑的提取

4、物；有效部位即氯仿部位采用索氏提取法、超聲提取法、回流提取法等工藝進行提取，得到不同工藝的提取物。采用微量稀釋法，以金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌5種細菌為模型，對不同極性部位和不同工藝的提取物進行活性篩選，確定兩面針藥材的抑菌活性部位和提取工藝。并用紙片瓊脂擴散法對43個兩面針藥材樣品進行抑菌活性的測定，得到各樣品對5種細菌的抑菌圈。
　　 2.建立兩面針藥材HPLC化學指紋圖譜通過優(yōu)

5、化液相色譜條件，根據(jù)化學指紋圖譜研究的要求，運用國家藥典委員會頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件，建立并評價兩面針藥材抑菌活性部位的HPLC指紋圖譜。
　　 3.構(gòu)建兩面針藥材“譜-效”關(guān)系模型采用后退逐步回歸統(tǒng)計學分析方法，將兩面針藥材HPLC指紋圖譜的峰面積進行量化，與紙片瓊脂擴散法測得的兩面針藥材抑菌活性結(jié)果結(jié)合，構(gòu)建兩面針藥材抑菌“化學譜”—“藥效”關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.氯仿提取部位為兩面

6、針藥材抑菌作用較好的活性部位，該部位含有氯化兩面針堿等生物堿類成分。樣品溶液制備工藝為氯仿直接回流法。樣品的抑菌活性由高到低排列為：廣西扶綏縣2＞廣西大新碩龍＞廣西那坡縣＞廣西欽州那麗鎮(zhèn)＞對照藥材1＞廣西崇左。
　　 2.建立的兩面針藥材HPLC指紋圖譜相似度大多數(shù)達到0.9左右，其中的24個指紋峰包括氯化兩面針堿、白屈菜紅堿等成分。所建立的HPLC指紋圖譜也能很好的區(qū)分兩面針藥材與其非藥用部位、偽品等，這有利于進一步規(guī)范兩面針

7、藥材的質(zhì)量標準。
　　 3.后退逐步回歸法表明：兩面針藥材HPLC指紋圖譜中的24個指紋峰中，有17個峰對金黃色葡萄球菌有作用，金黃色葡萄球菌的“譜—效”關(guān)系式為：Y=11.562-9.542X1+3.149X3-3.720X4+7.903X5-3.265X7-1.422X8+1.929X10+1.919X11-1.614X12-1.143X13-3.969X14-1.438X15-3.036X16+3.412X20+5.826

8、X21+1.882X22+3.836X24(R2=0.921)；有17個峰對大腸埃希氏菌作用，大腸埃希氏菌“譜—效”關(guān)系式為：Y=11.074-5.969X1+2.102X2+2.809X3+2.051X4+3.522X5-1.638X6-0.840X7-0.789X8-0.844X10+1.070X11-0.575X13-1.150X15-2.031X16-1.795X18+1.302X21-0.576X23+3.952X24(R2=

9、0.914)；有13個峰對枯草芽孢桿菌有作用，枯草芽孢桿菌的“譜-效”關(guān)系式為：Y=12.397-8.362X1+2.211X3-2.200X4+2.656X5-2.516X8+1.421X9+1.347X11-2.552X16+2.946X18+1.366X19+2.311X20+3.835X21+3.119X24(R2=0.908)；有13個峰對傷寒沙門氏菌有作用，傷寒沙門氏菌的“譜-效”關(guān)系式為：Y=7.505-4.742X1-2

10、.478X4+2.999X5+1.969X6+1.958X11-1.170X12-1.108X13-1.273X15+4.023X19+1.740X20+2.953X21+1.902X22+0.412X23(R2=0.936)；有17個峰對肺炎克雷伯氏菌有作用，肺炎克雷伯氏菌的“譜—效”關(guān)系式為：Y=11.103-8.016X1+1.177X3-1.717X4+3.849X5-1.183X7-1.355X8+1.525X10+1.206

11、X11-1.217X12-0.623X13-1.435X14-1.612X16+1.556X19+2.235X20+4.794X21+1.162X22+2.910X24(R2=0.919)。10個兩面針藥材樣品的驗證結(jié)果表明所得的“譜—效”關(guān)系式計算值與實際值十分接近。
　　 結(jié)論：
　　 1.不同產(chǎn)地、不同來源的兩面針藥材，其化學成分的不同，直接影響到了藥效的差異。因此，傳統(tǒng)的以單一或某幾個化學成分對兩面針藥材的質(zhì)量進