血清抗C1q抗體在狼瘡腎炎中的臨床意義及其致病機制研究.pdf

1、研究背景：
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病,多種自身抗體的產(chǎn)生及補體系統(tǒng)的變化是其主要特征之一。近年的研究發(fā)現(xiàn),系統(tǒng)性紅斑狼瘡,尤其是狼瘡腎炎(Lupus nephritis,LN)患者中存在一種針對Clq膠原樣區(qū)(CLR)的IgG型自身抗體,其在狼瘡腎炎發(fā)病機制中的作用和臨床意義可能僅次于抗ds—DNA抗體,因而日益為人們所重視。

2、
　　 Clq是第一補體成分Cl的一個亞基,是補體經(jīng)典激活途徑的始動因素。Clq同時也是一種具有多種功能的蛋白質(zhì),參與天然免疫和適應性免疫。Clq缺陷小鼠(Clqa-/-)會產(chǎn)生抗核抗體和腎小球腎炎；而在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的動物模型MRL-lpr小鼠的血清中可檢測出抗Clq的自身抗體,并有抗Clq抗體在腎組織中沉積,提示抗Clq抗體參與了小鼠狼瘡樣病變。近年的研究還發(fā)現(xiàn),在SLE出現(xiàn)腎損傷前或腎疾病復發(fā)前,就能夠檢測到抗Clq抗體,

3、抗Clq抗體水平升高預示狼瘡患者腎臟受累或狼瘡腎炎復發(fā)。
　　 狼瘡腎炎是影響SLE預后的重要因素。在既往眾多的研究中,除腎活檢外,并無可靠的指標評價腎預后。人們一直研究一些血清學指標與狼瘡腎炎的關(guān)系,例如抗ds—DNA抗體、補體水平等,但評價不一?？笴lq抗體能否作為有效評價狼瘡腎炎腎臟病變和病情活動性,以及判斷療效和預后的一個新的血清學指標,值得進一步探討。
　　 抗Clq抗體參與了狼瘡腎炎的發(fā)病,但其具體的發(fā)病機制

4、未明。Clq是補體經(jīng)典激活途徑的始動因素。當Clq的球狀頭部與免疫復合物結(jié)合,激活Cl,啟動各種細胞反應,包括吞噬作用。當血清中存在抗Clq抗體,抗Clq抗體與Clq的膠原樣區(qū)結(jié)合,導致補體經(jīng)典途徑不能進行,細胞凋亡和免疫復合物清除障礙,刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生更多的自身抗體,可能是導致狼瘡腎炎發(fā)病的機制之一。最新的研究發(fā)現(xiàn),抗Clq抗體識別結(jié)合狀態(tài)的Clq,尤其是與結(jié)合在早期凋亡細胞表面的Clq相結(jié)合,提示抗Clq抗體、Clq與狼瘡腎炎細胞凋

5、亡之間可能有直接的關(guān)聯(lián)?？笴lq抗體與細胞凋亡的相關(guān)性,以及在狼瘡腎炎發(fā)病機制的作用需要深入探討。
　　 因此,本文擬從以下兩個方面對Clq抗體在狼瘡腎炎中的臨床意義及致病作用機制作進一步的研究:
　　 1.檢測狼瘡腎炎患者血清中的抗Clq抗體,探討血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動、腎臟病理改變的相關(guān)性,并追蹤觀察抗Clq抗體水平的變化與狼瘡腎炎療效和預后的關(guān)系,探討抗Clq抗體的臨床意義。
　　 2.檢測

6、狼瘡腎炎患者外周血單個核細胞(PBMCs)的凋亡率以及腎臟組織中凋亡細胞和凋亡小體的沉積,研究抗Clq抗體與狼瘡腎炎細胞凋亡的相關(guān)性,探討抗Clq抗體在狼瘡腎炎發(fā)病機制中的作用。
　　 狼瘡腎炎患者抗Clq抗體的檢測及臨床意義
　　 研究目的:探討血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動、腎臟病理改變的相關(guān)性,并追蹤觀察抗Clq抗體水平的變化與狼瘡腎炎療效和預后的關(guān)系,研究抗Clq抗體的臨床意義。
　　 研究方法:

7、首先以臨床橫斷面研究的策略,分析血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動以及腎臟病理改變的相關(guān)性。對全部入組病例進行隨訪,分別于治療1個月和3個月后再次抽取外周靜脈血檢測抗Clq抗體。再以血清抗Clq抗體水平的變化作為研究因素,運用隊列研究的策略,分析其對狼瘡腎炎療效和預后的影響。以入組時間為隨訪起點,以尿蛋白轉(zhuǎn)陰性作為第一隨訪終點,以病情緩解作為第二隨訪終點。研究對象為2002年6月至2006年12月在廣州市第一人民醫(yī)院和中山大學附屬第

8、一醫(yī)院風濕科治療,并有同期腎活檢資料的狼瘡腎炎患者,共73例。另有40例無腎損害的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和40例健康體檢人員作為對照。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清抗Clq抗體。
　　 計量資料以x±s表示,兩組間均數(shù)差異采用t檢驗比較,多組間均數(shù)差異采用方差分析比較。相關(guān)性分析運用Pearson相關(guān)分析方法。血清抗Clq抗體水平及其變化對尿蛋白轉(zhuǎn)陰和病情緩解的影響,采用生存分析的方法。并運用COX回歸進行多因素分析,校正

9、其它因素可能造成的混雜偏倚。全部統(tǒng)計學運算采用STATA7.0軟件。
　　 研究結(jié)果:
　　 73例狼瘡腎炎中58例(79.5％)抗Clq抗體陽性,40例無腎損害的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中11例(27.5％)陽性；狼瘡腎炎組血清抗Clq抗體水平(95.3±55.2 U/ml)高于非狼瘡腎炎組(26.0±11.7)(P<0.001)。血清抗Clq抗體水平與SLEDAI評分和尿蛋白含量呈正相關(guān)(r=0.792,P<0.001和r

10、=0.419,P<0.001)；與補體C3、C4水平呈負相關(guān)(r=-0.639,P<0.001和r=-0.519,P<0.001)。
　　 方差分析顯示,Ⅳ型LN的血清抗Clq抗體水平最高,與其他各病理類型間比較有顯著性差異(與Ⅱ型比較,P<0.001；與Ⅴ型比較,P=0.008)；其次是Ⅲ型,血清抗Clq抗體水平高于Ⅱ型(P=0.024)。血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎腎臟活動指數(shù)(AI)(r=0.555,P<0.001)和慢

11、性指數(shù)(CI)(r=0.390,P<0.001)呈正相關(guān)。具體主要與下列指標有相關(guān)性:白細胞浸潤(r=0.316,P=0.006),血管內(nèi)皮細胞增生(r=0.324,P=0.005),纖維素樣壞死(r=0.344,P=0.003),細胞性/纖維細胞性新月體形成(r=0.448,P<0.001)和纖維性新月體形成(r=0.499,P<0.001)。腎臟Clq沉積≥++的血清抗Clq抗體水平高于Clq沉積-/+患者(P<0.001)。

12、>　　 根據(jù)治療三個月后的血清抗Clq抗體水平變化分組。治療三個月后血清抗Clq抗體水平明顯下降者(組1,即血清抗Clq抗體水平下降≥50％或檢測陰性)有41例(56.2％):治療后血清抗Clq抗體水平?jīng)]有顯著下降者(組2,即血清抗Clq抗體水平下降<50％或升高)有32例(43.8％)。對所有患者進行隨訪追蹤,每月進行一次終點評估。以尿蛋白轉(zhuǎn)陰作為觀察的終點,作Kaplan—Meier曲線和Log-rank檢驗,結(jié)果顯示,兩組尿蛋白

13、轉(zhuǎn)陰的中位數(shù)時間有統(tǒng)計學差異(x2=9.58,P=0.002),治療后血清抗Clq抗體水平下降<50％或升高者(組2)尿蛋白轉(zhuǎn)陰時間更遲。
　　 另一個隨訪的終點是狼瘡腎炎病情緩解。COX回歸多因素方法分析影響狼瘡腎炎病情緩解的因素。納入分析的因素包括:年齡、性別、病程、C3、C4、IgG、IgA、IgM、血沉、24小時尿蛋白、血尿、血肌酐、腎臟病理WHO分型、腎臟病理活動性指數(shù)(AI)、腎臟病理慢性指數(shù)(CI)、抗dsDNA抗

14、體、治療前和治療1個月、治療3個月后的血清抗Clq抗體水平,以及環(huán)磷酰胺治療等。結(jié)果顯示,腎臟病理WHO分型、CI、治療3個月后的血清抗Clq抗體水平和環(huán)磷酰胺治療是影響狼瘡腎炎病情緩解的獨立因素。其中,較重的病理類型(WHOⅣ、Ⅴ型)、慢性指數(shù)高以及治療3個月后仍有高滴度的血清抗Clq抗體是影響狼瘡腎炎病情緩解的危險因素,而環(huán)磷酰胺治療是促進狼瘡腎炎病情緩解的有利因素。
　　 研究結(jié)論:狼瘡腎炎患者血清中存在抗Clq抗體?？笴

15、lq抗體與狼瘡性腎炎的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血清抗Clq抗體不僅能夠反映狼瘡腎炎的活動性,而且在一定程度上反映腎臟的病理改變,對評估腎損害情況、評價療效及判斷預后均有重要臨床意義。檢測血清抗Clq抗體,并在治療中密切觀察這一指標的動態(tài)變化,結(jié)合其他臨床表現(xiàn),將為判斷病情和制定狼瘡腎炎的治療策略提供更好的依據(jù)。
　　 抗Clq抗體與細胞凋亡的相關(guān)性及在狼瘡腎炎發(fā)病機制中的作用
　　 研究目的:探討血清抗Clq抗體與狼瘡腎炎細

16、胞凋亡的相關(guān)性,進一步研究抗Clq抗體在狼瘡腎炎發(fā)病機制中的作用。
　　 研究方法:
　　 探討狼瘡腎炎細胞凋亡情況:(1)檢測狼瘡腎炎患者PBMCs凋亡率；(2)檢測腎臟組織中的凋亡細胞及凋亡小體的沉積情況。研究狼瘡腎炎患者血清抗Clq抗體與PBMCs凋亡率和腎臟組織中凋亡細胞、凋亡小體沉積的相關(guān)性。研究對象是活動性狼瘡腎炎患者40例,其中26例狼瘡腎炎患者有同期腎活檢資料,另有5例病理改變?yōu)槲⑿〔∽兊姆抢钳從I炎患者的

17、腎臟病理標本作為疾病對照,20例健康體檢人員的外周血作為正常對照。
　　 用Amlexin V/PI流式細胞分析法檢測患者外周血淋巴細胞凋亡率。用脫氧核糖核昔酸末端轉(zhuǎn)移酶介導dUTP切口末端標記法(terminal deoxynucleotidyltransferase—mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)檢測腎臟組織中凋亡細胞及凋亡小體。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清抗Clq抗

18、體。
　　 計量資料以x±s表示,兩組間均數(shù)差異采用t檢驗比較。率問的比較采用X2檢驗。全部統(tǒng)計學運算采用STATA7.0軟件。
　　 研究結(jié)果:
　　 活動期狼瘡腎炎患者PBMCs早期凋亡率及總凋亡率均顯著高于正常對照組(P<0.001)?？笴lq抗體陽性組與抗Clq抗體陰性組比較,PBMCs早期凋亡率顯著增加(P=0.001),總凋亡率亦顯著增加(P=0.003)。兩組患者的PBMCs早期凋亡率和總凋亡率均高

19、于正常對照組(P<0.001)。
　　 42.3％(11/26)狼瘡腎炎患者腎小球中的凋亡細胞及凋亡小體的沉積增加。腎小球有明顯凋亡細胞及凋亡小體沉積患者的血清抗Clq抗體水平高于沉積不明顯的患者(P<0.001)。5例腎臟微小病變的患者均未見腎小球有明顯凋亡細胞及凋亡小體沉積。
　　 研究結(jié)論:抗Clq抗體與狼瘡腎炎PBMCs凋亡率和腎組織中的凋亡細胞及凋亡小體的積聚增加相關(guān)。推測血清抗Clq抗體通過削弱Clq對巨噬細