TERE1(UBIAD1)在Ras-MAPK信號通路和細(xì)胞凋亡中的研究.pdf

1、TERE1(Transitional epithelial response gene1)移行上皮反應(yīng)基因1,又稱UBIAD1(UbiA prenyltransferase domain containing1)含UbiA異戊烯基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域1。用FISH(Fluorescence in situ Hybridization)方法檢測到TERE1(UBIAD1)定位于人體1p36微衛(wèi)星標(biāo)記D1S2667和D1S434之間,編碼一個含33

2、8個氨基酸的蛋白質(zhì),分子量為36.8KD。該基因廣泛表達(dá)于人體各組織中。TERE1(UBIAD1)可以通過與ApoE相互作用來影響脂代謝,調(diào)節(jié)膽固醇的運(yùn)輸和儲藏。TERE1(UBIAD1)突變在人眼中引發(fā)SCCD(Schnyder Crystalline Corneal Dystrophy)疾病。生物信息學(xué)預(yù)測TERE1(UBIAD1)是一個十次跨膜蛋白,C端和N端均位于膜內(nèi),包含一個異戊烯基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域。TERE1(UBIAD1)是人

3、體中的MK-4合成酶,具有側(cè)鏈切割和異戊烯化功能,而且TERE1(UBIAD1)參與體內(nèi)脂代謝的調(diào)節(jié),與膀胱癌的形成有關(guān)。推測TERE1(UBIAD1)通過與ApoE相互作用,利用組織中MK-4為底物,參與脂質(zhì)代謝,調(diào)節(jié)組織中膽固醇的量,影響腫瘤發(fā)生和SCCD形成。
　　為研究TERE1(UBIAD1)與Ras的關(guān)系。本文利用siRNA技術(shù)敲低HEK293細(xì)胞中TERE1(UBIAD1)的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Ras-MAPK信號通路的下游蛋

4、白ERK被激活。加入SS(Sulindac Sulfide)、GW5074等抑制劑阻斷Ras信號通路,檢測不到磷酸化的ERK,證明TERE1(UBIAD1)與Ras蛋白或Ras通路上游蛋白有相互作用,細(xì)胞中TERE1(UBIAD1)的表達(dá)量可以調(diào)節(jié)Ras-MAPK信號通路的激活與否。結(jié)合實(shí)驗(yàn)室其他人FRET和IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)TERE1(UBIAD1)與Ras蛋白有相互作用,是Ras蛋白的負(fù)調(diào)控子。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在敲低TERE1(UBI

5、AD1)表達(dá)的HEK293細(xì)胞中轉(zhuǎn)染BFP-H-Ras和RBD(Ras binding domain)后,Ras在質(zhì)膜上的積累量明顯增多。
　　TERE1(UBIAD1)與腫瘤細(xì)胞有什么關(guān)系呢?通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將外源TERE1(UBIAD1)基因?qū)氚螂装┘?xì)胞系T24中,細(xì)胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TERE1(UBIAD1)48小時后,實(shí)驗(yàn)組T24細(xì)胞數(shù)目銳減。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TERE1(UBIAD1)的實(shí)驗(yàn)

6、組T24細(xì)胞活力明顯降低,且差異顯著。流式細(xì)胞術(shù)檢測到轉(zhuǎn)染TERE1(UBIAD1)的T24細(xì)胞周期發(fā)生改變,出現(xiàn)凋亡峰。FITC和PI雙染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TERE1(UBIAD1)48小時后,處于凋亡期的T24細(xì)胞占93.7％。
　　本文通過在HEK293和T24細(xì)胞中的實(shí)驗(yàn),證明TERE1(UBIAD1)和Ras存在相互作用,是Ras蛋白的負(fù)調(diào)控子,參與Ras-MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。外源導(dǎo)入TERE1(UBIAD1)后,T24細(xì)胞