HIV感染中髓樣樹突狀細(xì)胞數(shù)量減少的機(jī)制及功能改變研究.pdf

1、自1983年首次發(fā)現(xiàn)HIV以來，HIV/AIDS已成為嚴(yán)重危害人類健康的傳染病。免疫反應(yīng)對(duì)HIV感染后的發(fā)病及預(yù)后均有重要影響。髓樣樹突狀細(xì)胞(mDC)作為專職的抗原遞呈細(xì)胞，是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。HIV感染者中mDC的變化直接影響著免疫反應(yīng)的質(zhì)與量。目前已有多位學(xué)者報(bào)道HIV感染者外周血中mDC數(shù)量減少，但是發(fā)生機(jī)制不明確；同時(shí)，HIV感染中mDC的功能變化尚不清楚，為進(jìn)一步明確HIV感染中mDC數(shù)量減少的機(jī)制以及mDC的

2、功能變化，我們進(jìn)行了以下兩部分研究。
　　 第一部分：正如其他學(xué)者之前報(bào)道的HIV感染中mDC數(shù)量減少一樣，本文也發(fā)現(xiàn)了同樣現(xiàn)象。但是mDC數(shù)量減少的機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步闡明。我們就此進(jìn)行了研究。本部分研究選取了14例HIV感染者及10例健康志愿者，采集并分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。我們通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)mDC中凋亡通路的上游關(guān)鍵酶--活化的caspase8和caspase9的表達(dá)并對(duì)比兩組的差異。我們也檢測(cè)了死亡受體FAS、DR

3、4、DR5和死亡配體FASL、TRAIL以及歸巢受體CCR7在各組細(xì)胞中表達(dá)。我們觀察到HIV感染者外周血mDC數(shù)量顯著低于健康人，而CCR7在mDC中的表達(dá)則顯著高于健康人。我們發(fā)現(xiàn)相比健康人，HIV感染者外周血中表達(dá)活化的caspase8和caspase9的mDC的比例均顯著增加。HIV感染者中mDC數(shù)量與表達(dá)活化的caspase8的mDC比例呈負(fù)相關(guān)，而與表達(dá)活化的caspase9的mDC比例無顯著相關(guān)性。同時(shí)，HIV感染者外周血

4、表達(dá)活化的caspase8和caspase9的CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞比例也均顯著高于健康人。HIV感染者表面表達(dá)死亡配體FASL的mDC、CD4T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞的比例均顯著高于健康人，而表達(dá)DR4、DR5以及TRAIL的細(xì)胞比例無顯著變化。另外，我們用免疫磁珠分離了14例健康志愿者的mDC，并用HIV-1 Bal株感染mDC。我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)與HIV共培養(yǎng)后，mDC中活化的caspase

5、8和caspase9的表達(dá)顯著上調(diào)，而死亡受體和配體表達(dá)無顯著變化。我們的實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致HIV感染者外周血mDC減少的重要原因。HIV感染中的mDC凋亡同時(shí)涉及到細(xì)胞內(nèi)凋亡途徑和細(xì)胞外凋亡途徑，而其中細(xì)胞外凋亡途徑的活化更是直接影響到mDC數(shù)量。我們的實(shí)驗(yàn)也提示mDC遷移至淋巴結(jié)是致HIV感染者外周血mDC數(shù)量減少的原因之一。
　　 第二部分：mDC誘導(dǎo)過弱的免疫反應(yīng)將無法控制HIV復(fù)制，而過強(qiáng)的免疫反應(yīng)將導(dǎo)致全身免疫激

6、活。HIV感染后mDC功能改變目前尚有爭(zhēng)論。另外HIV刺激的pDC通過IDO使幼稚性T淋巴細(xì)胞向Treg分化，從而破壞Th17/Treg平衡。而IDO在mDC中表達(dá)最多，但mDC對(duì)Th17/Treg分化中的影響卻不清楚。為了明確HIV感染后mDC誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的變化以及mDC對(duì)Th17/Treg的影響，我們進(jìn)行了第二部分的研究。我們研究了HIV刺激對(duì)mDC誘導(dǎo)幼稚性T淋巴細(xì)胞增殖和分化方向的影響。我們用磁珠法分離了10例健康人mDC，并用

7、HIV-1 Bal共培養(yǎng)刺激。之后我們將用免疫磁珠分離的同種異體的幼稚性T淋巴細(xì)胞加入到mDC中進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。共培養(yǎng)5天后，我們觀察幼稚性T淋巴細(xì)胞的增殖情況以及Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的分化結(jié)果。我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)HIV組幼稚性T淋巴細(xì)胞增殖比例明顯高于對(duì)照組，但活化的CD8 T淋巴細(xì)胞比例與對(duì)照組無顯著差異。而HIV組與對(duì)照組見的Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞以及Th17/Treg比例均無顯著變化。我們的實(shí)驗(yàn)顯示HIV刺激后的mDC誘